Shenzhen Wensidun Technology Co., Ltd.
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Aflatoxines totales ELISA Test Kit pour le tissu d'arachide de maïs d'alimentation 96 Wells/kit
1. Principe de essai de kits de mycotoxine
Ce kit est basé sur l'immunoessai concurrentiel indirect d'enzymes pour la détection des aflatoxines totales. Des antigènes conjugués sont enduits d'un préenduisage sur des bandes de microwell. L'aflatoxine dans l'échantillon concurrence de l'antigène conjugué enduit d'un préenduisage sur la bande de microwell pour des anticorps d'anti-aflatoxine. Après que le conjugué d'enzymes soit ajouté, le substrat de TMB est ajouté pour la souillure. La valeur de la densité optique (OD) d'un échantillon est négativement corrélée avec de l'aflatoxine dans l'échantillon. Cette valeur est comparée à une courbe standard, et le niveau résiduel d'aflatoxine est alors obtenu.
2. Spécifications techniques
Sensibilité : 0,02 ppb
La température d'incubateur : 25℃
Temps de culture : 30min~15min
Limite de détection :
Alimentation, riz, maïs, arachide, tissu, huile de table 2ppb
Taux de réaction croisée :
Aflatoxine B1 100%
Aflatoxine M1 91,2%
Aflatoxine B2 68,4%
Aflatoxine G1 4,7%
Aflatoxine G2 2,7%
Taux de récupération :
Alimentation, riz, maïs, arachide, tissu, huile de table 95±35%
3. Composants de essai de kits de mycotoxine
| 1 | Bandes micro-bien | 12 bandes avec 8 puits démontables pièce | |
| 2 | solution étalon 6× (1 ml chacun) | 0ppb | 0.02ppb |
| 0.06ppb | 0.18ppb | ||
| 0.54ppb | 1.62ppb | ||
| 3 | Conjugué d'enzymes | 7ml | chapeau rouge |
| 4 | Solution de fonctionnement d'anticorps | 7ml | chapeau bleu |
| 5 | Substrat A | 7ml | chapeau blanc |
| 6 | Substrat B | 7ml | chapeau noir |
| 7 | Arrêtez la solution | 7ml | chapeau jaune |
| 8 | 20× a concentré le tampon de lavage | 40ml | chapeau blanc |
| 9 | 20× a concentré redissoudre la solution | 50ml | chapeau transparent |
4. Préparation témoin
Instructions pour l'usage (les points suivants doivent être traités avant le prétraitement)
1) l'expérience peut seulement employer les astuces jetables, et les astuces doivent être remplacées en aspirant différents réactifs ;
2) avant l'expérience, chaque ustensile expérimental doit être nettoyé et re-nettoyé s'il y a lieu pour éviter la contamination interférant les résultats expérimentaux.
Préparation de solution avant traitement préparatoire d'échantillon :
1) solution de dissolution d'échantillon
Employez 1 part 20X a concentré redissoudre la solution et se dissoudre avec 19 parts a désionisé l'eau pour obtenir un échantillon prêt à employer redissolvant la solution.
2) extrait- échantillon
Employez 7 parts de méthanol et dissolvez dans 3 parts a désionisé l'eau pour un extrait- échantillon prêt à employer.
Préparation témoin
4,1 préparation des échantillons de tissu, d'alimentation, de riz et de maïs
1) a mis 1.0±0.05g de l'échantillon moulu dans un tube à centrifuger 50ml, ajoutent 5ml de l'extrait- échantillon, la secousse pour 3min, centrifugeuse à 20°C pour 10min au-dessus de 4000r/min ;
2) prennent le surnageant 100ul, ajoutent l'échantillon 700ul redissolvant la solution, secouent bien ;
3) prennent 50μl pour l'essai
Facteur de dilution : 40
4,2 préparation des échantillons d'huile de table
1) prélèvent à 1.0±0.05g l'échantillon d'huile de table dans un tube à centrifuger 50ml ; ajoutez 5ml d'extrait- échantillon, puis ajoutez 4ml du n-hexane, la secousse pour 3min, centrifugeuse à 4000r/min à 20℃ pour 10min ;
2) l'écart le surnageant, prennent 100ul de la solution moyenne de couche, ajoutent 700ul d'échantillon redissolvant la solution, et secouent bien ;
3) prennent 50μl pour l'essai
Facteur de dilution : 40
4,3 préparation des échantillons d'arachide
1) l'arachide 1.0±0.05g mise a écrasé l'échantillon dans un tube à centrifuger 50ml ; ajoutez 5ml d'extrait- échantillon, puis ajoutez 4ml du n-hexane, la secousse pour 3min, centrifugeuse à 4000r/min au-dessus de 20℃ pour 10min ;
2) l'écart le surnageant, prennent 100ul de la solution moyenne de couche, ajoutent 400ul d'échantillon redissolvant la solution, et secouent bien ;
3) prennent 50μl pour l'essai
Facteur de dilution : 25
5. Procédures d'ELISA
5,1 instructions pour l'usage
1) apportent des réactifs d'ELISA à la température ambiante (20 - °C) 25 avant emploi.
2) a mis le réactif d'ELISA de nouveau à 2-8°C juste après l'utilisation.
3) la reproductibilité du processus d'analyse d'ELISA dépend en grande partie de la cohérence du lavage de plat, et l'opération correcte de lavage de plat est le centre de déterminer la procédure d'ELISA.
4) pendant tous les processus d'incubation de la température constante, évitez la lumière, et scellez le microplate avec un film de couverture.
5,2 procédures d'opération
1) apportent le kit d'essai à la température ambiante (℃ 20-25) pour au moins la minute 30, notent que chaque réactif doit être secoué également avant emploi ;
2) a mis les bandes micro-bien exigées dans des cadres de plat. A rescellé le microplate inutilisé, stocké au ℃ 2-8, non congelé.
3) préparation de solution : prenez le tampon du lavage 40ml concentré par 20×, dissolvez avec de l'eau désionisé à 1h19 1 (tampon de lavage concentré par 20× de 1 part + 19 parts d'eau désionisée), ou préparez comme quantité requise.
4) numérotation : nombre les micro-puits selon les échantillons et la solution étalon ; chaque échantillon et solution étalon devraient être exécutés en double ; enregistrez leurs positions.
5) ajoutent la norme/échantillon : Ajoutez le µL 50 de l'échantillon ou la solution étalon dans les puits en double distincts, puis ajoutez le conjugué d'enzymes, 50 µL/well ; puis solution de fonctionnement d'anticorps, 50 µL/well. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement, joint le microplate à la membrane de couverture, incubez à 25°C pour la minute 30 dans l'obscurité.
6) microplate de lavage : Ouvrez soigneusement le membrance de couverture, versent le liquide hors du microwell ; ajoutez 250 µL/well de tampon de lavage, lavez entièrement pendant 4-5 fois, 15-30 s chaque fois, puis sortez et agitez-vous pour sécher avec le papier absorbant. (Utilisez la lance inutilisée pour percer la bulle après sec)
7) coloration : ajoutez le µL 50 de la solution du substrat A puis solution de 50 µL B dans chaque puits. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement, andincubate à 25°C pour 15min dans l'obscurité pour la coloration.
8) détermination : additionnez 50 que le µL du arrêtent la solution dans chaque puits. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement. Placez la longueur d'onde du lecteur de microplate à 450 nanomètre pour déterminer la valeur d'OD de chaque puits. (Recommandez de lire la valeur d'OD au 450/630 nanomètre à double longueur d'onde à moins de la minute 5).
6. Jugement de résultat
Il y a deux méthodes pour juger les résultats ; le premier est le jugement approximatif, alors que le deuxième est la détermination quantitative. Note que la valeur d'OD de l'échantillon a une corrélation négative avec de toute l'aflatoxine dans l'échantillon.
6,1 détermination qualitative
La gamme de concentration (ppb) peut être obtenue par comparé la valeur moyenne d'absorbance aux normes. Supposez que valeur d'absorbance de l'échantillon un est 0,3, l'échantillon deux est 1,0, et les normes sont : 0ppb de 2,243 ; 0.02ppb de 1,816 ; 0.06ppb de 1,415 ; 0.18ppb de 0,74 ; 0.54ppb de 0,313 ; 1.62ppb de 0,155. Alors la concentration de l'échantillon un est de l'ordre de 0.54ppb | 1.62ppb ; L'échantillon deux est 0.06ppb | 0.18ppb. La gamme de concentration de l'aflatoxine totale dans les échantillons peut être obtenue par multiplié par la dilution correspondante de l'échantillon.
6. Analyse quantitative 2
Afin de calculer la concentration des échantillons, une courbe standard devrait être faite. Avant que la courbe standard soit faite, le concept de % d'absorbance devrait être de savoir.
Calcul de % d'absorbance :
| Pourcentage de valeur d'absorbance = | B | ×100% |
| B0 |
Valeur de la moyenne OD de B-the de l'échantillon ou de la solution étalon.
Valeur de la moyenne OD de B0-the des 0 solutions étalons de ng/mL.
La norme zéro est ainsi rendue égale à 100 % et les valeurs d'absorbance sont citées dans les pourcentages. Les valeurs ont calculé pour les normes sont entrées dans un système des coordonnées sur le papier de graphique semilogarithmic contre toute la concentration en aflatoxine [ng/L]. Toute la concentration en aflatoxine dans ng/L (ppb) correspondant à l'absorbance de chaque échantillon peut être lue de la courbe d'étalonnage.
Un logiciel particulier pour l'analyse de résultat d'ELISA facilitera de doubles ou multiples déterminations. Si vous avez besoin, appelez svp pour demander.
7. Précautions
1) la température ambiante en-dessous du ℃ 25 ou la température des réactifs et des échantillons n'étant pas retourné à la température ambiante (℃ 20-25) mènera à une valeur standard plus basse d'OD.
2) la sécheresse du microplate dans le procédé de lavage sera accompagnée des situations comprenant les courbes standard non linéaires et la reproductibilité indésirable ; Continuez ainsi à la prochaine étape juste après le lavage.
3) mélange même avant d'ajouter tous les réactifs.
4) la solution d'arrêt est la solution acide sulfurique de 2 M, évitent d'entrer en contact avec la peau.
5) n'emploient pas le kit dépassant sa date d'échéance. L'utilisation des réactifs dilués ou frelatés des kits mènera aux variations de la sensibilité et des valeurs de détection d'OD. N'échangez pas les réactifs des kits de différents numéros de lot pour employer.
6) stockage : magasin au ℃ 2-8, non congelé. Mettez le microplate inutilisé dans un sac d'automatique-cachetage pour le resceller. La substance étalon et la couleur sans couleur anciennes est sensible à la lumière, et elles ne peuvent pas être directement exposées ainsi à la lumière.
7) jettent la solution de coloration avec n'importe quelle couleur qui indique la dégénérescence de cette solution. La valeur de détection (450/630nm) des 0 solutions étalons (0 ppb) de moins de 0,5 ((A450nm<0>
8) la température optima de réaction est le ℃ 25, et les températures trop élevées ou si basses auront comme conséquence les variations de la sensibilité de détection et des valeurs d'OD.
8. Date de stockage et d'échéance
Stockage : magasin au ℃ 2-8, non congelé.
Date d'échéance : 12 mois ; la date de la production est sur la boîte.
Note : Si l'emballage sous vide du microplate a la fuite, il est encore valide pour employer, n'affectent pas le résultat d'essai, soit de détendre pour employer.
Q1 : Quand sera-t-il embarqué ?
A1 : Nous embarquerons les marchandises pour vous dès que possible dans un délai de 7 jours ouvrables après réception du paiement. (En cas de facteurs externes tels que l'épidémie, la livraison peut être retardée)
Q2 : Soutient-il OEM/ODM ?
A2 : Il peut être soutenu, mais la quantité spécifique doit être plus de 100 000 morceaux, qui est commode pour les produits adaptés aux besoins du client.
Q3 : Comment votre usine va-t-elle en termes de contrôle de qualité ?
A3 : Nous avons nationalement certifié ISO9001 et ISO13485. Notre processus de fabrication se conforme aux procédures standard pour assurer la qualité du produit optima.
Q4 : Comment fournir le service après-vente ?
A4 : Nous fournissons le service après-vente technique en ligne professionnel. Nous pouvons te fournir des conseils faces à face par l'intermédiaire de la vidéo, du téléphone, etc.
Q5 : Quelle est la méthode de paiement ?
A5 : Nous recevons le paiement par T/T.
Q6 : Comment se transporter ?
A6 : Choisissez la meilleure méthode de expédition pour vous en obtenant des citations de nos beaucoup de transporteurs coopératifs, et également de bateau selon vos conditions.