Sensibilité diagnostique 96Wells/Kit du nitrofuranne AMOZ 0.03ppb ELISA Kit For Milk Food Safety de crevette

Kit ELISA de diagnostic Nitrofuran AMOZ pour la sensibilité du lait 0,03 ppb 96 puits / kit

1.Trousse de diagnostic ELISAPrincipe

Ce kit de détection est basé sur un immunodosage enzymatique compétitif pour la détection d'AMOZ dans les échantillons.Les antigènes conjugués sont pré-enduits sur des barrettes de micropuits.L'AMOZ dans l'échantillon entre en compétition avec l'antigène conjugué pré-enduit sur la bande de micropuits pour l'anticorps anti-AMOZ.Après l'ajout du conjugué enzymatique, le substrat TMB est ajouté pour la coloration.La valeur de densité optique (DO) d'un échantillon est négativement corrélée avec l'AMOZ qu'il contient.Cette valeur est comparée à une courbe standard et la concentration en AMOZ est ensuite obtenue.

2. Spécifications techniques

Sensibilité : 0,03 ppb

Température d'incubation : 25℃

Temps d'incubation : 30min～15min

Limite de détection Tissu, œuf, miel : 0,1 ppb

Taux de réaction croisée

AMAZ 100%

AHD < 0,1 %

AOZ < 0,1 %

SEM < 0,1 %

Taux de récupération

Tissu 80 ± 25%

Miel 75 ± 25%

Oeuf 95 ± 25%

3.Kit de test de sécurité alimentaire Nitrofuran AMOZ ELISAComposants

4. Matériel nécessaire mais non fourni
1) Matériel : lecteur de microplaques, imprimante, homogénéisateur, sécheur d'azote, vortex, centrifugeuse, tube de mesure, balance (réciproque 0.01g), incubateur, bain-marie ;
2) Micropipettes : monocanal 20-200µL, 100-1000µL, multicanal 30-300µl ;
3) Réactifs : NaOH, acétate d'éthyle, n-hexane, HCl (environ 36,5 %), K2HPO4 3H2O

5. Préparation de l'échantillon

instruire
Les points suivants doivent être abordés avant tout type de prétraitement d'échantillon :
1) L'expérience ne peut utiliser que des embouts jetables, et les embouts doivent être remplacés lors de l'aspiration de différents réactifs ;
2) Avant l'expérience, chaque équipement expérimental doit être nettoyé et re-nettoyé si nécessaire pour éviter toute contamination interférant avec les résultats expérimentaux.

Préparation de la solution avant le prétraitement de l'échantillon :
1) 0,1 M K2HPO4 : Dissoudre 11,4 g de K2HPO4 3H2O dans de l'eau déminéralisée à 500 ml.
2) HCl 1 M : dissoudre 8,6 mL de HCl (environ 36,5 %) dans de l'eau déminéralisée jusqu'à 100 mL.
3) NaOH 1 M : dissoudre 4 g de NaOH dans de l'eau déminéralisée jusqu'à 100 mL.
4) Diluer 2× la solution de redissolution concentrée avec de l'eau déionisée à 1:1 (1 ml de solution de redissolution concentrée + 1 ml d'eau déionisée) pour la redissolution de l'échantillon.

5.1 Préparation des échantillons

un)Tissu, des œufs
1) Peser 1 ± 0,05 g d'échantillon homogène, ajouter 4 ml d'eau distillée, 0,5 ml de HCl 1M et 100 µl de 2-nitrobenzaldéhyde (C7H5NO3) dans chaque tube et agiter de manière appropriée pendant 2 minutes ;
2) Incuber une nuit à 37°C (environ 16 heures) ou dans un bain-marie à 56°C (2 heures).
3) Ajouter 5 ml de K2HPO4 0,1 M, 0,4 ml de NaOH 1 M et 6 ml d'acétate d'éthyle dans chaque tube et agiter pendant 30 secondes.
4) Centrifuger à température ambiante (20-25 °C) au-dessus de 4 000 r/min pendant 10 min (s'il y a émulsification ou si la couche d'acétate d'éthyle est inférieure à 3 ml, incuber l'échantillon dans un bain-marie à 80 °C pendant 10 min et centrifuger à plusieurs reprises ; ou augmenter la vitesse et prolonger le temps de centrifugation).
5) Transférer la couche d'acétate d'éthyle de 3 mL dans un nouveau tube à centrifuger et évaporer à sec avec de l'azote ou de l'air à 50°C.
6) Dissoudre le résidu séché dans 2 mL de n-hexane, ajouter 1 mL de la solution reconstituée diluée, bien mélanger pendant 30 secondes, centrifuger à température ambiante (20-25°C) à une vitesse supérieure à 4000 rpm pendant 10 minutes;éliminer la phase supérieure de n-hexane.(En cas d'émulsification, retirer la phase supérieure de n-hexane, incuber l'échantillon dans un bain-marie à 70 °C pendant 10 à 20 minutes et centrifuger à plusieurs reprises).
7) Prélevez 50 µL de la couche inférieure pour analyse.
Facteur de dilution de l'échantillon : 2

b) le miel
1) Peser 2 ± 0,05 g d'échantillon homogène (miel), ajouter 4 ml d'eau distillée, 0,5 ml de HCl 1 M et 100 µl de 2-nitrobenzaldéhyde (C7H5NO3) dans chaque tube, agiter de manière appropriée pendant 2 minutes ;
2) Incuber une nuit à 37°C (environ 16 heures) ou dans un bain-marie à 56°C (2 heures).
3) Ajouter 5 ml de K2HPO4 0,1 M, 0,4 ml de NaOH 1 M et 6 ml d'acétate d'éthyle dans chaque tube et agiter pendant 30 secondes.
4) Centrifuger à température ambiante (20-25 °C) au-dessus de 4 000 r/min pendant 10 min (s'il y a émulsification ou si la couche d'acétate d'éthyle est inférieure à 3 ml, centrifuger l'échantillon à plusieurs reprises dans un bain-marie à 80 °C pendant 10 min ; ou augmenter la vitesse et prolonger le temps de centrifugation).
5) Transférer la couche d'acétate d'éthyle de 3 mL dans un nouveau tube à centrifuger et évaporer à sec avec de l'azote ou de l'air à 50°C.
6) Dissoudre le résidu séché dans 2 ml de n-hexane, ajouter 1 ml de solution reconstituée diluée, bien mélanger pendant 30 secondes, centrifuger à température ambiante (20-25°C) à une vitesse de 4000 tr/min ou plus pendant 10 minutes;éliminer la phase supérieure de n-hexane.(En cas d'émulsification, retirer la phase supérieure de n-hexane, incuber l'échantillon dans un bain-marie à 70 °C pendant 10 à 20 minutes et centrifuger à plusieurs reprises).
7) Prélevez 50 µL de la couche inférieure pour analyse.
Facteur de dilution de l'échantillon : 1

6. Procédure ELISA

6.1 Descriptif
1) Amener tous les réactifs et barrettes de micropuits à température ambiante (20-25°C) avant utilisation ;
2) Remettre tous les réactifs à 2-8°C immédiatement après utilisation ;
3) La reproductibilité des tests ELISA dépend largement de la cohérence du lavage des plaques.Le bon fonctionnement du lavage des plaques est la clé de la procédure ELISA ;
4) Pendant l'incubation à température constante, tous les échantillons et réactifs doivent être protégés de la lumière et chaque microplaque doit être scellée avec un film protecteur.

6.2 Mode opératoire
1) Mettez le kit à température ambiante (20-25°C) pendant au moins 30 minutes, notez que chaque réactif doit être bien agité et mélangé avant utilisation, et placez les barrettes de micropuits nécessaires dans le cadre de la plaque.Les microplaques non utilisées doivent être refermées et conservées à 2-8°C, non congelées.
2) Préparation de la solution : 40 ml de tampon de lavage concentré 20 × dilué à 1:19 avec de l'eau déminéralisée (1 volume de tampon de lavage concentré 20 × + 19 volumes d'eau désionisée).Ou préparez-vous au besoin.
3) Numérotation : numéroter les micropuits en fonction des échantillons et solutions étalons ;chaque échantillon et chaque solution étalon doivent être préparés en double et leurs positions enregistrées.
4) Ajouter 50 µL d'échantillon ou de solution standard dans des puits répliqués séparés ;ajouter 50 ul de conjugué enzymatique dans chaque puits, puis ajouter 50 μl de solution de travail d'anticorps et secouer la plaque à la main pour mélanger doucement.Sceller la microplaque avec un film protecteur et incuber à 25°C pendant 30 minutes.
5) Verser le liquide dans le micropuits, éponger sur du papier absorbant, ajouter 250 µL/puits de tampon de lavage pour laver la plaque de micropuits pendant 15 à 30 secondes, puis retirer et éponger avec du papier absorbant, répéter 4 à 5 fois.(S'il y a des bulles d'air après le tapotement, coupez-les avec une pointe propre).
6) Développement de la couleur : Ajouter 50 µL de Substrat A dans chaque puits, suivi de 50 µL de Substrat B. Mélanger doucement en secouant la plaque à la main, puis incuber dans l'obscurité à 25 °C pendant 15 min pour développer la couleur.
7) Dosage : Ajouter 50 μL de solution d'arrêt dans chaque puits.Mélanger délicatement en secouant la plaque à la main.Réglez la longueur d'onde du lecteur de microplaques à 450 nm pour déterminer la valeur OD de chaque puits.(Il est recommandé de lire les valeurs de DO à deux longueurs d'onde 450/630 nm en 5 minutes).

7. Jugement du résultat

Il existe deux méthodes pour juger les résultats : la première est le jugement approximatif, tandis que la seconde est la détermination quantitative.Notez que la valeur OD de l'échantillon a une corrélation négative avec la concentration AMOZ.

7.1 Détermination qualitative

La plage de concentration (ng/mL) d'AMOZ peut être obtenue en comparant la valeur moyenne de la DO de l'échantillon avec celle de la solution standard.En supposant que la valeur OD de l'échantillonⅠ est de 0,3 et que celle de l'échantillonⅡ est de 1,0, la valeur OD des solutions standard est : 2,243 pour 0 ppb, 1,816 pour 0,03 ppb, 1,415 pour 0,09 ppb, 0,74 pour 0,27 ppb, 0,313 pour 0,81 ppb. , 0,155 pour 2,43 ppb, en conséquence la plage de concentration de l'échantillonⅠ est de 0,81 à 2,43 ppb, et celle de l'échantillonⅡ est de 0,09 à 0,27 ppb.

7.2 Détermination quantitative

Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance sont obtenues pour la valeur DO moyenne (B) de l'échantillon et de la solution standard divisée par la valeur DO (B0) de la première solution standard (standard 0) et ensuite multipliée par 100 %, c'est-à-dire ,

B - la valeur moyenne de la DO de l'échantillon ou de la solution standard

B0—la valeur moyenne de la DO de la solution standard à 0 ng/mL

Dessinez la courbe standard avec les pourcentages d'absorption de la solution standard et les valeurs de semilogarithme de la solution standard AMOZ (ng/mL) comme axe Y et X, respectivement.Lire la concentration correspondante de l'échantillon à partir de la courbe standard en incorporant son pourcentage d'absorption dans la courbe standard.La valeur résultante est ensuite multipliée par le facteur de dilution correspondant, obtenant finalement la concentration d'AMOZ dans l'échantillon.

8. Questions nécessitant une attention particulière
1) La température ambiante est inférieure à 25 ℃ ou la température du réactif et l'échantillon n'est pas revenu à la température ambiante (20-25 ℃), ce qui entraînera une diminution de la valeur OD standard.
2) Lors du processus de lavage, le séchage de la microplaque s'accompagnera de la non-linéarité de la courbe standard et de la reproductibilité insatisfaisante ;par conséquent, passez à l'étape suivante immédiatement après le lavage.
3) Bien mélanger, sinon il y aura une mauvaise reproductibilité.
4) La solution d'arrêt est une solution d'acide sulfurique 2 M, éviter tout contact avec la peau.
5) Ne pas utiliser le kit au-delà de la date de péremption.L'utilisation de réactifs dilués ou frelatés du kit peut entraîner des modifications des valeurs de sensibilité et de détection OD.Ne remplacez pas les réactifs de différents lots de kits.
6) Refermer les microplaques inutilisées dans des sachets auto-scellants.Les solutions standard et les coupleurs incolores sont sensibles à la lumière et ne peuvent pas être directement exposés à la lumière.
7) Jetez toute solution de teinture dont la couleur indique que la solution s'est dégradée.Une valeur de détection inférieure à 0,5 pour la solution standard 1 (0 ppb) indique une dégradation.
8) La température de réaction optimale est de 25 ℃, et la sensibilité de détection et la valeur OD changeront si la température est trop élevée ou trop basse.

9. Stockage et durée de validité
Stockage : Conserver à 2-8°C, ne pas congeler.
Date d'expiration : 12 mois ;la date de production est sur la boîte.
Remarque : Si l'emballage sous vide de la microplaque fuit, il peut toujours être utilisé sans affecter les résultats du test, vous pouvez donc l'utiliser en toute confiance.

Q1 : Quand sera-t-il expédié ?
A1 : Nous expédierons les marchandises pour vous dès que possible dans les 7 jours ouvrables après réception du paiement.(En cas de facteurs externes tels que l'épidémie, la livraison peut être retardée)

Q2 : Prend-il en charge OEM/ODM ?
A2: Il peut être pris en charge, mais la quantité spécifique doit être supérieure à 100 000 pièces, ce qui est pratique pour les produits personnalisés.

Q3 : Comment se porte votre usine en termes de contrôle qualité ?
A3 : Nous avons certifié ISO9001 et ISO13485 à l'échelle nationale.Notre processus de production est conforme aux procédures standard pour assurer une qualité de produit optimale.

Q4 : Comment assurer le service après-vente ?
A4: Nous fournissons un service après-vente technique en ligne professionnel.Nous pouvons vous fournir des conseils personnalisés par vidéo, téléphone, etc.

Q5 : Quelle est la méthode de paiement ?
A5 : Nous recevons le paiement par T/T.

Q6 : Comment expédier ?
A6: Choisissez la meilleure méthode d'expédition pour vous en obtenant des devis de nos nombreux transporteurs coopératifs, et expédiez également selon vos besoins.