Ce kit de test est basé sur le test immunoenzymatique compétitif pour la détection de MQCA dans l'échantillon.Les antigènes de couplage sont pré-enduits sur les bandes de micropuits.Le MQCA dans l'échantillon et les antigènes de couplage pré-enduits sur les bandes de micropuits entrent en compétition pour l'anticorps anti-MQCA.Après l'addition du conjugué enzymatique, le substrat TMB est ajouté pour la coloration.La valeur de densité optique (OD) de l'échantillon a une corrélation négative avec le MQCA qu'il contient.Cette valeur est comparée à la courbe standard et la concentration en MQCA est ensuite obtenue.

2. Spécifications techniques

Sensibilité : 0,5 ppb
Température de l'incubateur : 25℃
Temps d'incubateur : 30min～15min

Limite de détection:
Tissu 1 ppb

Taux de réaction croisée :
MQCA 100%
Olaquindox <0,1 %
Taux de récupération:
Tissu 85%±10%

3. Composants

1	Barrettes de micropuits	12 barrettes de 8 puits amovibles chacune
2	6× solution étalon (1 ml chacune)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Conjugué enzymatique concentré	1 ml	une casquette rouge
4	Solution de travail d'anticorps	8ml	casquette bleue
5	Substrat A	7ml	Bonnet blanc
6	SubstratB	7ml	casquette noire
sept	Solution d'arrêt	7ml	casquette jaune
8	Solution de redissolution	50ml	bouchon transparent
9	Tampon de lavage concentré 20×	40ml	Bonnet blanc

4. Matériel nécessaire mais non fourni

1) Equipements : lecteur de microplaques (450 nm / 630 nm), homogénéisateur, oscillateur, centrifugeuse, pipettes de mesure, dessiccateur d'azote et balance (sensibilité réciproque de 0,01 g), incubateur.
2) Micropipettes : monocanal 20 à 200 µL et 100 à 1000 µL et multicanal 30～300 µl ;
3) Réactifs : acétate d'éthyle, n-hexane, HCl, NaCl, CH3CN

5. Prétraitement de l'échantillon

Des instructions
Les points suivants doivent être traités avant le prétraitement de tout type d'échantillon :
1) Seuls les embouts jetables peuvent être utilisés pour les expériences et les embouts doivent être changés lorsqu'ils sont utilisés pour absorber différents réactifs ;
2) Avant l'expérience, chaque ustensile expérimental doit être vérifié pour être propre et doit être re-nettoyé si nécessaire, afin d'éviter la contamination qui interfère avec les résultats expérimentaux.

La préparation des échantillons
1) Extrait d'échantillon (conserver à 2 ~ 8 ℃ pendant 1 mois) : Prendre 8,6 ml de HCl concentré, ajouter de l'eau déminéralisée à 500 ml, puis ajouter 10 g de NaCl pour obtenir l'extrait d'échantillon.

5.1 Tissus de bétail et de volaille (poulet, canard, porc) :
1. Prélevez 2 ± 0,05 g de l'échantillon homogénéisé dans un tube à centrifuger de 50 ml ;
2. Ajouter 4 ml d'extrait d'échantillon, bien agiter pendant 1 min ;
3. Ajouter 4 ml d'acétate d'éthyle et 2 ml de CH3CN, agiter correctement pendant 10 secondes ;Centrifugeuse à 4000 tr/min à température ambiante (20 - 25 ℃) pendant 10 min (Remarque : cette étape ne nécessite qu'une agitation pendant 10 s, une agitation trop longue conduira à l'émulsification, si l'émulsification apparaît, prenez un certain surnageant, puis agitez légèrement le tube pendant 5 s , centrifuger à nouveau puis peut obtenir suffisamment de surnageant);
4. Prenez 3 ml de phase organique de couche supérieure dans un récipient transparent, ci-dessous pour sécher avec de l'azote ou de l'air à
bain d'eau 56℃;
5. Ajouter 1 ml de N-hexane, agiter pendant 30 secondes, puis ajouter 0,5 ml de solution de redissolution, agiter et bien mélanger pendant 30 secondes ;centrifuger à 4000 tr/min à température ambiante (20-25 ℃) pendant 5 min.
6. Retirez la phase organique de la couche supérieure. Prenez 50 µL de couche inférieure pour analyse.
Pli de dilution de l'échantillon : 0,5

6. Procédures ELISA

6.1 Consignes
1) Amener tous les réactifs et barrettes de micropuits à température ambiante (20-25 ℃) avant utilisation ;
2) Remettez tous les réactifs à 2-8 ℃ immédiatement après utilisation ;
3) La reproductibilité de l'analyse ELISA dépend dans une large mesure de la cohérence du lavage des plaques.Le bon fonctionnement du lavage des plaques est le point clé des procédures d'ELISA ;
4) Pour l'incubation à température constante, tous les échantillons et réactifs doivent éviter l'exposition à la lumière, et chaque microplaque doit être scellée par la membrane de couverture.

6.2 Procédures d'exploitation
1) Sortez tous les réactifs nécessaires et placez-les à température ambiante (20-25 ℃) pendant au moins 30min.Notez que chaque réactif doit être secoué pour se mélanger uniformément avant utilisation ;
2) Prenez les barrettes de micropuits et les cadres de plaque nécessaires.Refermer la microplaque inutilisée, stockée à 2- 8 ℃ ;
3) Préparation de la solution : diluer 40 mL de tampon de lavage concentré 20 x avec de l'eau déminéralisée à 1 h 19 (1 volume de tampon de lavage concentré 20 x + 19 volumes d'eau déionisée) ou préparer selon la quantité nécessaire ;
4) Numérotation : numéroter les micropuits en fonction des échantillons et de la solution étalon ;chaque échantillon et solution standard doit être effectué en double ;enregistrer leurs positions;
5) Préparez la solution de mélange de la solution de travail d'anticorps et du conjugué enzymatique concentré : mélangez la solution de travail d'anticorps et le conjugué enzymatique concentré à 10:1 uniformément (1000ul de solution de travail d'anticorps + 100ul de conjugué enzymatique concentré, cette solution de mélange doit être utilisée une fois préparée, elle ne peut pas être stocké, la quantité de paquet a un montant supplémentaire, préparez-vous car la proportion est OK.)
6) Ajouter 20 µL d'échantillon ou de solution standard pour séparer les puits en double, puis ajouter 70 µL de solution mixte de solution de travail d'anticorps et de conjugué enzymatique concentré dans chaque puits.Mélanger en agitant doucement, sceller la microplaque avec la membrane de couverture et incuber à 25 ℃ à l'obscurité pendant 30 min ;
7) Laver la microplaque avec le tampon de lavage à 250 µL/puits quatre à cinq fois ;tremper le puits avec le tampon de lavage pendant 15-30 sec, rabattre pour sécher avec du papier absorbant (s'il y a des bulles après le battement, coupez-les avec les embouts propres) ;
8) Coloration : ajouter 50 µL de la solution de substrat A et 50 µL de la solution B dans chaque puits.Mélanger en agitant doucement et incuber à 25 ℃ pendant 15 min dans l'obscurité pour la coloration ;
9) Détermination : ajouter 50 µL de solution d'arrêt dans chaque puits.Mélanger en secouant doucement.Réglez la longueur d'onde du lecteur de microplaques à 450 nm pour déterminer la valeur OD.(recommander de lire la valeur OD à la double longueur d'onde 450/630 nm dans les 5 min).

7. Jugement du résultat

Il existe deux méthodes pour juger les résultats;le premier est le jugement approximatif, tandis que le second est la détermination quantitative.Notez que la valeur OD de l'échantillon a une corrélation négative avec le contenu de MQCA.

7.1 Détermination qualitative
La plage de concentration (ng/mL) peut être obtenue à partir de la comparaison de la valeur moyenne de la DO de l'échantillon avec celle de la solution standard.En supposant que la valeur OD de l'échantillon Ⅰ est de 0,3 et celle de l'échantillon Ⅱ est de 1,0, tandis que celles des solutions standard sont les suivantes : 2,043 pour 0 ppb, 1,716 pour 0,5 ppb, 1,215 pour 1,5 ppb, 0,74 pour 4,5 ppb, 0,313 pour 13,5 ppb et 0,155 pour 40,5 ppb, en conséquence la plage de concentration de l'échantillonⅠ est de 13,5 à 40,5 ppb, et celle de l'échantillon Ⅱ est de 1,5 à 4,5 ppb.

7.2 Détermination quantitative
Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance sont équivalentes au pourcentage de la valeur moyenne de DO (B) de l'échantillon et de la solution standard divisée par la valeur de DO (B0) de la première solution standard (0 standard) et ensuite multipliée par 100 % , C'est,

Pourcentage de la valeur d'absorbance =	B	×100 %
	B0

B—la valeur DO moyenne (puits doubles) de l'échantillon ou de la solution standard
B0—la valeur moyenne de la DO de la solution standard à 0 ng/mL
Dessinez la courbe standard avec les pourcentages d'absorption des solutions standard et les valeurs de semilogarithme des solutions standard MQCA (ng/mL) comme axe Y et X, respectivement.Lire la concentration correspondante de l'échantillon à partir de la courbe standard en incorporant son pourcentage d'absorption dans la courbe standard.La valeur résultante est ensuite multipliée par le facteur de dilution correspondant, obtenant ainsi finalement la concentration de MQCA dans l'échantillon.
L'utilisation du logiciel d'analyse professionnel de ce kit sera plus pratique pour l'analyse précise et rapide d'une grande quantité d'échantillons.(Veuillez nous contacter pour ce logiciel)

8. Précautions

1. La température ambiante inférieure à 25 ℃ ou la température des réactifs et des échantillons non ramenés à la température ambiante (20-25 ℃) conduira à une valeur OD standard inférieure
2. La sécheresse de la microplaque dans le processus de lavage s'accompagnera des situations comprenant les courbes standard non linéaires et la reproductibilité indésirable
3. Mélangez uniformément chaque réactif et mélange réactionnel et lavez soigneusement la microplaque, sinon il y aura une reproductibilité indésirable
4. La solution d'arrêt est la solution d'acide sulfurique 2 M, évitez tout contact avec la peau ;
5. Placer la microplaque inutilisée dans un sachet auto-scellant pour le refermer.La substance standard et le colorant incolore sont sensibles à la lumière et ne peuvent donc pas être directement exposés à la lumière.
6. Ne pas utiliser le kit au-delà de sa date de péremption.L'utilisation de réactifs dilués ou falsifiés provenant des kits entraînera des modifications de la sensibilité et des valeurs de DO de détection.Ne pas échanger les réactifs des kits de différents numéros de lot à utiliser
7. Jeter la solution de coloration avec n'importe quelle couleur qui indique la dégénérescence de cette solution.La valeur de détection de la solution standard 0 inférieure à 0,5 indique sa dégénérescence
8. La température de réaction optimale est de 25 ℃, et des températures trop élevées ou trop basses entraîneront des changements dans la sensibilité de détection et les valeurs OD.

9. Stockage et date de péremption

Stockage : stocker à 2-8 ℃, non congelé.
Date d'expiration : 12 mois ;la date de production est sur la boîte.
Remarque : si l'emballage sous vide de la microplaque présente des fuites, il est toujours valable d'utiliser, n'affecte pas le résultat du test, détendez-vous pour l'utiliser.

Q1 : Quand sera-t-il expédié ?
A1 : Nous expédierons les marchandises pour vous dès que possible dans les 7 jours ouvrables après réception du paiement.(En cas de facteurs externes tels que l'épidémie, la livraison peut être retardée)

Q2 : Prend-il en charge OEM/ODM ?
A2: Il peut être pris en charge, mais la quantité spécifique doit être supérieure à 100 000 pièces, ce qui est pratique pour les produits personnalisés.

Q3 : Comment se porte votre usine en termes de contrôle qualité ?
A3 : Nous avons certifié ISO9001 et ISO13485 à l'échelle nationale.Notre processus de production est conforme aux procédures standard pour assurer une qualité de produit optimale.

Q4 : Comment assurer le service après-vente ?
A4: Nous fournissons un service après-vente technique en ligne professionnel.Nous pouvons vous fournir des conseils personnalisés par vidéo, téléphone, etc.

Q5 : Quelle est la méthode de paiement ?
A5 : Nous recevons le paiement par T/T.

Q6 : Comment expédier ?
A6: Choisissez la meilleure méthode d'expédition pour vous en obtenant des devis de nos nombreux transporteurs coopératifs, et expédiez également selon vos besoins.

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