Protocole d'essai ELISA
Étiqueter les bandes individuelles qui seront utilisées et les réactifs aliquotés comme suit:
| Composant |
Volume par réaction |
24 Réactions |
| Anticorps à la kanamycine n° 1 |
50 uL |
1.2 ml |
| HRP-conjugué Ab #2 |
50 uL |
1.2 ml |
| 1X Solution de lavage |
10,0 mL |
24 ml |
| Arrêtez le tampon |
100 L |
2.4 ml |
| Substrate TMB |
100 L |
2.4 ml |
- Ajouter 50 I.U. de chaque norme de kanamycine en double dans différents puits (ajouter des normes à la plaque uniquement dans l'ordre de faible concentration à haute concentration).
- Ajouter 50 litres de chaque échantillon en double dans des puits d'échantillonnage différents.
- Ajoutez 50 I.U. d'Abside HRP-conjugué 2 à chaque puits et 50 I.U. d'Anticorps de Kanamycine 1 à chaque puits. Mélangez bien en agitant doucement la plaque manuellement pendant 30 secondes.
- Incuber la plaque pendant 30 minutes à température ambiante (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F). (Évitez la lumière directe du soleil et les bancs froids pendant l'incubation.) et
- Lavez la plaque 4 fois avec 250 I.L. de solution de lavage 1X. Après le dernier lavage, inverser la plaque et secouer doucement la plaque sur des serviettes en papier (Faites l'étape suivante immédiatement après le lavage des plaques.Ne laissez pas la plaque sécher à l'air libre entre les étapes de travail).
- Ajoutez 100 I.L. de substrat TMB. Tempérez la réaction immédiatement après l'ajout du substrat. Mélangez la solution en secouant doucement la plaque manuellement pendant 30 s pendant l'incubationNe remettez aucun substrat dans le récipient d'origine afin d'éviter toute contamination potentielle. Toute solution de substrat présentant une coloration indique une détérioration et doit être jetée.Il est recommandé de couvrir la plaque de microtiter pendant l'incubation.) et
- Après incubation pendant 15 minutes à température ambiante (20 ¢ 25- Je ne sais pas.C / 68 ¢ 77- Je ne sais pas.F), ajouter 100 I.U. de tampon stop pour arrêter la réaction enzymatique.
- Lire la plaque dès que possible après l'ajout du tampon d'arrêt sur un lecteur de plaque à longueur d'onde de 450 nm (avant la lecture,utiliser une lingette sans peluche sur le fond de la plaque pour s'assurer que l'humidité ou les empreintes digitales n'interfèrent pas avec les relevés).
