Labnovation Technologies, Inc.
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Kit en temps réel d'ACP de virus de Monkeypox (investigation d'ACP-fluorescence)
Monkeypox est une maladie zoonotique rare caractérisée par des éruptions cutanées provoquées par le virus de Monkeypox (MPV) et dont les symptômes cliniques sont semblables à la variole. Il peut être transmis par le contact avec les fluides corporels, lésions sur la peau ou sur les surfaces muqueuses internes, comme dans la bouche ou la gorge, les gouttelettes respiratoires et les objets souillés. La détection de l'ADN virale par l'amplification en chaîne par réaction (ACP) est l'essai préféré pour le monkeypox.
Le kit en temps réel d'ACP de virus de Monkeypox est basé sur la technologie en temps réel d'ACP. Ce qui convient à la détection qualitative des acides nucléiques de virus de monkeypox extraits à partir des échantillons cliniques tels que les écouvillons nasaux, l'écouvillon oro-pharyngé, la salive, l'urine, le tissu de lésion cutanée, l'exsudat, et le sang, etc.
Spécifications
| Nom de produit | Kit en temps réel d'ACP de virus de Monkeypox |
| Canaux de détection | FAM |
| IC | VIC |
| Valeur de Ct | 35 |
| Limite de détection | 200 Copies/mL |
| Stockage | -20℃±5℃ |
| Transport | Dans la condition gelée |
| Durée de conservation | 12 mois |
| Type témoin | Écouvillons nasaux, écouvillon oro-pharyngé, salive, urine, tissu de lésion, exsudat, et sang, etc. |
| Paquet | 24 essais/kit, 48 essais/kit, 96 essais/kit |
| Composants | Tampon de réaction d'ACP, mélange d'enzymes d'ACP, contrôle positif, contrôle négatif |
PRINCIPE D'ESSAI
Ce kit adopte la technologie en temps réel d'ACP de fluorescence, qui convient à la détection acide nucléique du virus de monkeypox extraite à partir des échantillons cliniques tels que le sérum humain, des échantillons d'exsudat de lésion et les spécimens d'écouvillon chaque système de réaction contient les amorces spécifiques et les sondes fluorescentes pour détecter le virus, et l'acide nucléique de virus de monkeypox peut être qualitativement détecté en rassemblant le signal fluorescent produit par amplification d'ACP.
En outre, des amorces spécifiques et les sondes fluorescentes pour le contrôle standard interne pour la détection clinique humaine de spécimen sont ajoutées à chaque système de réaction, et la collection, le transport et le processus d'extraction de l'échantillon à mesurer est surveillée, indiquant le faux négatif du résultat d'essai.
Système en temps réel d'ACP : Molarray MA-6000, ABI 7500, ViiATM 7, QuantStudio 5, QuantStudio 6/7 pro, QuantStudio 6/7 câble, Agilent Mx3000P/3005P, rotor-GeneTM 6000/Q, Bio-rad CFX96 TouchTM/iQTM 5, Hongshi SLAN-96S/96P, AGS8830, AGS4800.
COMPOSANTS
| Caractéristiques | LQ-000301 24T |
LQ-000302 48T |
LQ-000303 96T |
| Tampon de réaction d'ACP | tube 336μL×1 | tube 672μL×1 | tube 672μL×2 |
| Mélange d'enzymes d'ACP | tube 30μL×1 | tube 50μL×1 | tube 100μL×1 |
| Contrôle positif | tube 50μL×1 | tube 100μL×1 | tube 200μL×1 |
| Contrôle négatif | tube 50μL×1 | tube 100μL×1 | tube 200μL×1 |
| Instruction pour l'usage (PCs) | 1 | 1 | 1 |
INDEX DE PERFORMANCE DES PRODUITS
1. sensibilité : 200 copies/mL.
2. spécificité : Aucune réaction croisée au virus de l'entérovirus (EV), de la rougeole (système mv), au virus de rubéole (rv), au virus de Varicella-zoster (VZV), au virus de dengue (DenV), au virus humain de Parvovirus B19 (HPVB19), d'Epstein-barr (EBv), au virus du herpès humain 6 (HHV-6), etc.
3. précision : ≤ 5% de cv.
PROCÉDURES
1. Préparations témoin
L'extraction d'ADN à partir des échantillons cliniques est conduite selon les conditions et les procédures correspondantes dans le kit d'extraction d'ADN de virus. Extrait
L'ADN peut être directement employée pour la détection. Si l'échantillon n'est pas détecté juste après l'extraction, il devrait être stocké à -70°C pour le remplaçant, évitant les cycles gel-dégel répétés.
2. Préparation de système de réaction
(1) préparation de système : Sortez le réactif du kit, et permettez-lui de dégeler complètement à la température ambiante. Inversez le mélange et la centrifugeuse immédiatement. Réactions d'essai de N (N = nombre d'échantillons à examiner + contrôle positif + contrôle négatif + 1) sont préparés pour des systèmes de réaction, respectivement, comme suit.
| Composants | Volume pour 1 système de réaction | Volume pour le système de réaction de N |
| Tampon de réaction d'ACP | 14μL | 14μLx N |
| Mélange d'enzymes d'ACP | 1μL | 1μLx N |
| Volume total | 15μL | 15μLx N |
(2) distribution de système de réaction : Mélangez bien le tampon ci-dessus de réaction, centrifugeuse, et distribuez 15μL des parties aliquotes dans des tubes d'ACP appropriés à l'instrument fluorescent d'ACP. (Centrifugez les tubes d'ACP à 6,000rpm pour que 30s et transport prélève la zone de traitement.)
3. Chargement d'échantillon (zone de traitement d'échantillon)
Ajoutez l'échantillon 10μL acide nucléique, le contrôle négatif et le contrôle positif aux tubes ci-dessus d'ACP respectivement. Couvrez les tubes étroitement et la centrifugeuse à 6,000rpm pour 10s et puis le transport à la zone d'amplification d'ACP.
* précaution : Ajouter des échantillons dans l'ordre suivant est
a recommandé : échantillon acide nucléique de control-> négatif - > contrôle positif.
4. Amplification d'ACP (zone d'amplification d'ACP)
4,1 mettez les tubes caped d'ACP dans la machine en temps réel d'ACP pour l'amplification.
4,2 arrangement d'état de cycle d'ACP de fluorescence
| Programme | La température | Durée de réaction | Nombre de cycles |
|
1 |
50°C | minute 2 | 1 |
| 2 | 95°C | 2s | 1 |
| 3 | 95°C | 1s | 41 |
| 60°C | 13s/20s/35s |
Rassemblez les signaux fluorescents au ℃ de 3:60 d'étape ; 35s pour ABI 7500, 20s pour SLAN-96S/96P, tandis que 13s pour d'autres systèmes en temps réel d'ACP. Tout le volume : 25μL.
4,3 disposition après détection
Disposez les tubes d'ACP dans un sac scellé après la réaction et traitez les tubes utilisés en tant que déchets médicaux.
5. Arrangements pour l'analyse de résultat
Placez la ligne de base à une région avant l'amplification exponentielle où les signaux fluorescents de tous les échantillons sont relativement stables (aucune fluctuations significatives dans tous les échantillons) ; placez le point de départ (nombre de cycle) à partir des fluctuations de signal à commencer
phase de collection de fluorescence ; placez le point final (nombre de cycle) 1~3 cycles avant le Ct du premier échantillon pour écrire l'amplification exponentielle. 4~15 cycles sont recommandés.
Placez le juste de seuil au-dessus du point le plus élevé de la courbe négative d'amplification de contrôle (courbe irrégulière de bruit).
6. Critères de contrôle de qualité
Avant d'évaluer les résultats de spécimen, le contrôle positif et le contrôle négatif devraient être interprétés utilisant la table d'interprétation ci-dessous, et le contrôle positif et la courbe négative de contrôle doivent être exécutés correctement, autrement le résultat d'échantillon est invalide.
| Canaux Contrôles |
Valeur du seuil de cycle (Ct) | |
| FAM | VIC | |
| Contrôle positif | Ct > 40 ou UNDET | Ct > 40 ou UNDET |
| Contrôle négatif | ≤ 35 de Ct | ≤ 35 de Ct |
7. Interprétation des résultats d'essai
Des canaux de FAM pour le virus de Monkeypox, résultat de détection devraient être interprétés en tant que ci-dessous.
a) positif : Le ≤ 38 de Ct et la courbe d'amplification est en forme de s.
b) a suspecté : 38 < Ct=""> 40 ou ≤ nul de Ct et de Ct 35 dans le canal de VIC pour le deuxième essai.
c) négatif : Ct > 40 ou ≤ nul de Ct et de Ct 35 dans le canal de VIC.
d) contre-essai : Ct > 40 ou Ct nul et Ct > 35 dans le canal de VIC.