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Hauts puits du kit 96 d'Adiponectin ELISA d'humain de spécificité
et de sensibilité
Cat.No EHU1550
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se
rapportent la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel
répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui
recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des
procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire
cette instruction entièrement avant emploi.
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de
l'humain Adiponectin (également connu sous le nom d'ADP) en sérum,
plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules,
homogénats de tissu.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois
échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat
pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois
échantillons de concentration connue ont été examinées dans des
analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : CV<8%
Inter-analyse : CV<10%
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes la température ambiante. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn pendant 20
minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme
anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes
2000-3000 t/mn 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn
pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide
liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les
procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les
composants. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20
minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant
les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour
diluer la suspension de cellules la concentration en cellules
d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant
les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants
intérieurs. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20
minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement
et peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et
homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre
sur la glace. Dégelez 2-8°C ou gelez la centrifugeuse de -20°C.
2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Notez
Des concentrations d'échantillon devraient être prévues avant d'être employée dans l'analyse. Si la concentration d'échantillon n'est pas dans la marge de la courbe standard, les utilisateurs doivent nous contacter pour déterminer l'échantillon optimal pour leurs expériences particulières.
Des échantillons employer d'ici 5 jours devraient être stockés aux échantillons 2-8°C. devraient aliquoted ou doivent être stockés -20°C dans un délai de 1 mois ou -80°C dans les 6 mois. Avoid a répété les cycles gel-dégel.
Des échantillons devraient être apportés la température ambiante avant de commencer l'analyse.
Centrifugeuse pour rassembler l'échantillon avant emploi.>
Des échantillons contenant NaN3 ne peuvent pas être examinés pendant qu'il empêche l'activité de la peroxydase (HRP) de raifort sauvage.
Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.
le *Sample ne peut pas être dilué avec ce kit. En raison le du
matériel nous employons pour préparer le kit, l'interférence de
matrice témoin peut faussement diminuer la spécificité et
l'exactitude de l'analyse.
Préparation de réactif
La norme reconstituent le 120μl de la norme (64mg/L) avec 120μl du diluant standard pour produire d'une
solution d'action standard 32mg/L. Permettez la norme de se reposer
pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des
dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en
série la solution d'action standard (32mg/L) 1:2 avec le diluant
standard pour produire solutions 16mg/l, 8mg/L, 4mg/L et 2mg/L. Le
diluant standard sert de norme zéro (0 mg/l). Toute solution
restante devrait être gelée -20°C et être employée dans un délai
d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme
suit :
32mg/L | No.5 standard | diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
160mg/L | No.4 standard | 120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
8mg/L | No.3 standard | 120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
4mg/L | No.2 standard | 120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
2mg/L | No.1 standard | 120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
Concentration standard | No.5 standard | No.4 standard | No.3 standard | No.2 standard | No.1 standard |
64mg/L | 32mg/L | 16mg/L | 8mg/L | 4mg/L | 2mg/L |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau
distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les
cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu' ce
que les cristaux se soient complètement dissous.
Résumé
1. Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.
2. Ajoutez l'échantillon et le réactif d'ELISA dans chacun bien. Incubez pour 1 heure 37°C.
3. Lavez le plat 5 fois.
4. Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes 37°C.
5. Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.
6. Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.
Calcul de résultat
Construisez une courbe standard en traçant l'OD moyen pour chacun
standard sur (y) l'axe vertical contre la concentration sur (x)
l'axe horizontal et dessinez une courbe de l'ajustement normal par
les points sur le graphique. Ces calculs peuvent mieux être
exécutés avec le logiciel sur ordinateur de courbe-montage et la
ligne de l'ajustement normal peut être déterminée par analyse de
régression.
Références
Waki H., Yamauchi T., Kamon J., Ito Y., Uchida S., Kita S., Hara
K., Hada Y., Vasseur F., Froguel P., Kimura S., Nagai R., Kadowaki
T.
J. Biol. chim. 278:40352- 40363(2003)