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Le kit comme une insuline 96 du facteur de croissance 1 IGF1 ELISA
de haut rat de sensibilité jaillit
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat
a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps du rat IGF-1.
IGF-1 présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux
anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated
du rat IGF-1 est ajouté et lie IGF-1 dans l'échantillon. Alors
Streptavidin-HRP est ajouté et lie l'anticorps de Biotinylated
IGF-1. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant
une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et
la couleur se développe proportionnellement la quantité du rat
IGF-1. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la
solution et l'absorbance est mesurée 450 nanomètre.
Réactif fourni
Composants | Quantité |
Solution étalon (960ng/ml) | 0.5ml x1 |
Plat enduit d'un préenduisage d'ELISA | 12 * 8 bandes bonnes x1 |
Diluant standard | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Arrêtez la solution | 6ml x1 |
Solution A de substrat | 6ml x1 |
Solution B de substrat | 6ml x1 |
Concentré de tampon de lavage (30x) | 20ml x1 |
Anticorps du rat IGF-1 de Biotinylated | 1ml x1 |
Instruction d'utilisateur | 1 |
Scelleur de plat | PICS 2 |
Sac de tirette | 1 PIC |
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés la température ambiante
avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (960ng/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une
solution de l'action standard 480ng/ml. Permettez la norme de se reposer pendant
15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions.
Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2
de la solution d'action standard (480ng/ml) avec le diluant
standard pour produire les solutions 240ng/ml, 120ng/ml, 60ng/ml et
30ng/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/ml). Toute
solution restante devrait être gelée -20°C et être employée dans un
délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont
comme suit :
480ng/ml | No.5 standard | diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
240ng/ml | No.4 standard | 120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
120ng/ml | No.3 standard | 120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
60ng/ml | No.2 standard | 120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
30ng/ml | No.1 standard | 120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
Concentration standard | No.5 standard | No.4 standard | No.3 standard | No.2 standard | No.1 standard |
960ng/ml | 480ng/ml | 240ng/ml | 120ng/ml | 60ng/ml | 30ng/ml |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau
distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les
cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu' ce
que les cristaux se soient complètement dissous.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme
instruits. Apportez tous les réactifs la température ambiante avant
emploi. L'analyse est exécutée la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les
bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées
devraient être stockées 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps la norme bien parce que la solution
étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez
l'anticorps de 10μl anti-IGF-1 aux puits témoin, puis ajoutez le
streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits
de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur.
Incubez 60 minutes 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de
lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35
ml pour 30 secondes 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage
automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon
de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon
de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout
autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl chacun puits et puis ajoutez
la solution B du substrat 50μl chacun bien. Incubez le plat couvert
de nouveau scelleur pendant 10 minutes 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution chacun bien, la couleur bleue
changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits
immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate 450
nanomètre moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution
d'arrêt.
Cat.No E0709Ra
Chaîne standard de courbe : 3ng/ml - 900ng/ml
Sensibilité : 1.55ng/ml
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se
rapportent la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel
répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui
recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des
procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire
cette instruction entièrement avant emploi.
Références
Gonzalez-Parra S., Rosato R.R., Chowen J.A., Argente J., Groffen
C., Dits N., baisse S.L.
Horm. Recherche. 57:10 - 14(2002)