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Interleukin bovin 1 bêta (IL-1 bêta) kit d'ELISA
Cat.No E0197Bo
Chaîne standard de courbe : 0.5ng/L - 200ng/L
Sensibilité : 0.25ng/L
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se
rapportent la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel
répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui
recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des
procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire
cette instruction entièrement avant emploi.
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de
l'Interleukin bovin 1 bêta (également connu comme IL-1B) en sérum,
plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules,
homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat
a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps bovin d'IL-1B.
IL-1B présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux
anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps bovin alors
biotinylated d'IL-1B est ajouté et lie IL-1B dans l'échantillon.
Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie au Biotinylated
IL-1Bantibody. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé
pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors
ajoutée et la couleur se développe proportionnellement la quantité
d'IL-1B bovin. La réaction est terminée par l'addition d'acide
arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée 450 nanomètre.
Réactif fourni
Composants | Quantité |
Solution étalon (240ng/L) | 0.5ml x1 |
Plat enduit d'un préenduisage d'ELISA | 12 * 8 bandes bonnes x1 |
Diluant standard | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Arrêtez la solution | 6ml x1 |
Solution A de substrat | 6ml x1 |
Solution B de substrat | 6ml x1 |
Concentré de tampon de lavage (30x) | 20ml x1 |
Anticorps bovin de Biotinylated IL-1B | 1ml x1 |
Instruction d'utilisateur | 1 |
Scelleur de plat | PICS 2 |
Sac de tirette | 1 PIC |
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes la température ambiante. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn pendant 20
minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme
anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes
2000-3000 t/mn 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn
pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide
liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les
procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les
composants. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20
minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant
les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour
diluer la suspension de cellules la concentration en cellules
d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant
les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants
intérieurs. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20
minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement
et peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et
homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre
sur la glace. Dégelez 2-8°C ou gelez la centrifugeuse de -20°C.
2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés la température ambiante
avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (240ng/L) avec 120μl du diluant standard pour produire d'une
solution d'action standard 120ng/L. Permettez la norme de se
reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire
des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en
série la solution d'action standard (120ng/L) 1:2 avec le diluant
standard pour produire solutions 60ng/L, 30ng/L, 15ng/L et 7.5ng/L.
Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/L). Toute solution
restante devrait être gelée -20°C et être employée dans un délai
d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme
suit :
120ng/L | No.5 standard | diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
60ng/L | No.4 standard | 120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
30ng/L | No.3 standard | 120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
15ng/L | No.2 standard | 120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
7.5ng/L | No.1 standard | 120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
Concentration standard | No.5 standard | No.4 standard | No.3 standard | No.2 standard | No.1 standard |
240ng/L | 120ng/L | 60ng/L | 30ng/L | 15ng/L | 7.5ng/L |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau
distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les
cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu' ce
que les cristaux se soient complètement dissous.
Références
« Réseau immunisé vétérinaire de réactif des États-Unis :
ordres bovins exprimés de gène. »
U.S. Réseau immunisé vétérinaire Hudgens T., Tompkins D., Baldwin C.L. de réactif.
Soumis (NOV-2007) aux bases de données d'EMBL/GenBank/DDBJ