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96 kit de la croissance Factor-23 ELISA de fibroblaste de spécificité de rat de Wells haut pour la recherche
Cat.No E0170Ra
Chaîne standard de courbe : 5pg/ml - 1500pg/ml
Sensibilité : 2.56pg/ml
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
le produit de *This sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois échantillons de concentration connue ont été examinées dans des analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : Cv<8>
Inter-analyse : Cv<10>
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de la croissance Factor-23 de fibroblaste de rat (également connu sous le nom de FGF-23) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Précautions
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes la température ambiante. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes 2000-3000 t/mn 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez 2-8°C ou gelez la centrifugeuse de -20°C. 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Notez
le *Sample ne peut pas être dilué avec ce kit. En raison le du matériel nous employons pour préparer le kit, l'interférence de matrice témoin peut faussement diminuer la spécificité et l'exactitude de l'analyse.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anticorps de 10μl anti-FGF-23 aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate 450 nanomètre moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.
Referances
« Expression rénale de FGF23 dans la maladie rénale progressive du diabète et l'effet de l'inhibiteur du CÆ. »
Zanchi C., Locatelli M., Benigni A., Corna D., Tomasoni S., Rottoli D., Gaspari F., Remuzzi G., Zoja C.
Plos One 8 : e70775-e 70775(2013)