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Kit obligatoire du Lectin ELISA de CustomizedMannan de haute de spécificité de rat protéine obligatoire de Mannma
Ra de Cat.No E0629
Chaîne standard de courbe : 0.5ng/ml - 100ng/ml
Sensibilité : 0.25ng/ml
Stockage : Stockez les réactifs 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois échantillons de concentration connue ont été examinées dans des analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : Cv<8>
Inter-analyse : Cv<10>
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de la protéine obligatoire de Mannma de rat, Lectin obligatoire de mannane (également connu sous le nom de MBP/MBL) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps du rat MBP/MBL. MBP/MBL présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated du rat MBP/MBL est ajouté et lie MBP/MBL dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie l'anticorps de Biotinylated MBP/MBL. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement la quantité du rat MBP/MBL. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée 450 nanomètre.
Précautions
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes la température ambiante. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes 2000-3000 t/mn 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez 2-8°C ou gelez la centrifugeuse de -20°C. 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Notez
le *Sample ne peut pas être dilué avec ce kit. En raison le du matériel nous employons pour préparer le kit, l'interférence de matrice témoin peut faussement diminuer la spécificité et l'exactitude de l'analyse.
Résumé
1. Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.
2. Ajoutez l'échantillon et le réactif d'ELISA dans chacun bien. Incubez pour 1 heure 37°C.
3. Lavez le plat 5 fois.
4. Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes 37°C.
5. Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.
6. Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.
Calcul de résultat
Construisez une courbe standard en traçant l'OD moyen pour chacun standard sur (y) l'axe vertical contre la concentration sur (x) l'axe horizontal et dessinez une courbe de l'ajustement normal par les points sur le graphique. Ces calculs peuvent mieux être exécutés avec le logiciel sur ordinateur de courbe-montage et la ligne de l'ajustement normal peut être déterminée par analyse de régression.
Referances
« L'ischémie cérébrale focale induit la protéine de base
accrue de myelin et la transcription croissance-associée du gène
protein-43 dans des secteurs de peri-infarctus dans le cerveau de
rat. »
Gregersen R., Christensen T., Lehrmann E., Diemer N.H., Finsen B.
Recherche 138:384- de cerveau d'Exp 392(2001)