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Le type canine de sandwich 96 Wells de l'IL 6 Enzyme-a lié le kit
d'analyse d'immunosorbant avec le service d'OEM
Cat.No E0006Ca
Chaîne standard de courbe : 2pg/ml - 700pg/ml
Sensibilité : 1.02pg/ml
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se
rapportent la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel
répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui
recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
le produit de *This sert pour l'usage de recherches seulement, pas
des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire
cette instruction entièrement avant emploi.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme
instruits. Apportez tous les réactifs la température ambiante avant
emploi. L'analyse est exécutée la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les
bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées
devraient être stockées 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl la norme bien. Note : N'ajoutez pas
l'anticorps la norme bien parce que la solution étalon contient
l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez
l'anticorps de 10μl anti-IL-10 aux puits témoin, puis ajoutez le
streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits
de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur.
Incubez 60 minutes 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de
lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35
ml pour 30 secondes 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage
automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon
de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon
de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout
autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl chacun puits et puis ajoutez
la solution B du substrat 50μl chacun bien. Incubez le plat couvert
de nouveau scelleur pendant 10 minutes 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution chacun bien, la couleur bleue
changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits
immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate 450
nanomètre moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution
d'arrêt.
Résumé
1. Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.
2. Ajoutez l'échantillon et le réactif d'ELISA dans chacun bien.
Incubez pour 1 heure 37°C.
3. Lavez le plat 5 fois.
4. Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes
37°C.
5. Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.
6. Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois
échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat
pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois
échantillons de concentration connue ont été examinées dans des
analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : Cv<8>
Inter-analyse : Cv<10>
Précautions
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés la température ambiante
avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (800pg/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une
solution de l'action standard 400pg/ml. Permettez la norme de se reposer pendant
15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions.
Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2
de la solution d'action standard (400pg/ml) avec le diluant
standard pour produire les solutions 200pg/ml, 100pg/ml, 50pg/ml et
25pg/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 pg/ml). Toute
solution restante devrait être gelée -20°C et être employée dans un
délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont
comme suit :
400pg/ml | No.5 standard | diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
200pg/ml | No.4 standard | 120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
100pg/ml | No.3 standard | 120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
50pg/ml | No.2 standard | 120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
25pg/ml | No.1 standard | 120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
Concentration standard | No.5 standard | No.4 standard | No.3 standard | No.2 standard | No.1 standard |
800pg/ml | 400pg/ml | 200pg/ml | 100pg/ml | 50pg/ml | 25pg/ml |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau
distillée pour rapporter 600 ml de tampon du lavage 1x. Si les
cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu' ce
que les cristaux se soient complètement dissous.
Calcul de résultat
Construisez une courbe standard en traçant l'OD moyen pour chacun
standard sur (y) l'axe vertical contre la concentration sur (x)
l'axe horizontal et dessinez une courbe de l'ajustement normal par
les points sur le graphique. Ces calculs peuvent mieux être
exécutés avec le logiciel sur ordinateur de courbe-montage et la
ligne de l'ajustement normal peut être déterminée par analyse de
régression.