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Main gauche Elisa Kit Luteinizing Hormone
1. Utilisation prévue
Immunoessai pour la détermination quantitative in vitro de l'hormone luteinizing en sérum humain.
2. Résumé
3. Principe d'essai
Principe de sandwich. Durée totale d'analyse : 80 minutes.
• L'échantillon, Anti-main gauche a enduit des microwells et l'Anti-main gauche marquée par enzyme sont combinées.
• Pendant l'incubation, on laisse la main gauche présente dans l'échantillon réagir
simultanément avec des deux anticorps, ayant pour résultat les molécules de main gauche étant
serré entre la phase solide et les anticorps enzyme-liés.
• Après le lavage, un complexe est produit entre la phase solide, la main gauche dans l'échantillon et les anticorps enzyme-liés par des réactions immunologiques.
• La solution de substrat est alors ajoutée et catalysée par ce complexe, ayant pour résultat une réaction chromogène. La réaction chromogène en résultant est mesurée comme absorbance.
• L'absorbance est proportionnelle la quantité de main gauche dans l'échantillon.
Réactifs
Matériaux fournis
• Microplate enduit, 8 X12 bandes, 96 puits, enduits d'un préenduisage avec la souris monoclonale
ANTI-main gauche.
• Calibreurs, 6 fioles, 1 ml chacun, prêtes employer ; Concentrations : 0 (A), 5 (B), 20 (C), 50 (D), 100 (E) et 200 (F) mIU/mL.
• Le conjugué d'enzymes, 1 fiole, 11 ml de HRP (peroxydase de raifort) a marqué la souris Anti-main gauche monoclonale dans le tampon Tris-NaCl contenant BSA (albumine de sérum de boeuf). Contient 0,1% agents de conservation ProClin300.
• Substrat, 1 fiole, 11ml, prêt employer, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Arrêtez la solution, 1 fiole, 6,0 ml de 1 mole/l d'acide sulfurique.
• Concentré de solution de lavage, 1 fiole, 25 ml (40X s'est concentré), PBS-tween
solution de lavage.
• IFU, 1 copie.
• Couvercle de plat : 1 morceau.
Matériaux exigés (mais non fourni)
• Lecteur de Microplate avec la capacité absorbante de la longueur d'onde 450nm et 620nm.
• Joint de Microplate.
• Incubateur
4. Procédure d'essais
• Employez seulement le nombre de puits requis et composez les puits des microplates pour
chaque calibreur et échantillon analyser.
• Ajoutez le μL 25 des calibreurs ou des échantillons chaque puits.
• Ajoutez le μL 100 du conjugué d'enzymes chaque puits.
• Secouez le microplate doucement pendant 30 secondes pour se mélanger.
• Couvrez le plat de couvercle de plat et incubez au °C 37 pendant 60 minutes.
• Jetez le contenu du plat micro par la décantation ou l'aspiration. Si
en décantant, tapez et épongez le sec de plat avec le papier absorbant.
• Ajoutez le μL 350 de la solution de lavage, le décantez (robinet et tache) ou l'aspirez. Répétez 4 fois supplémentaires pour un total de 5 lavages. Un joint automatisé de bande de microplate peut être employé. la fin du lavage, inversez le plat et tapez n'importe quelle solution résiduelle de lavage sur le papier absorbant.
• Ajoutez le μL 100 du substrat chaque puits.
• Incubez la température ambiante (18-25℃) dans l'obscurité pour la réaction pendant 20 minutes. Ne secouez pas le plat après addition de sous-état.
• Ajoutez le μl 50 de la solution d'arrêt chaque puits.
• Secouez pendant 15-20 secondes pour mélanger le liquide dans les puits. C'est important pour
assurez-vous que les changements de couleur bleus pour jaunir complètement.
• Lisez l'absorbance de chaque puits 450 nanomètre (utilisant 620 630 nanomètre en tant que
longueur d'onde de référence pour réduire au minimum des imperfections bonnes) dans un lecteur micro de plat.