Méthode du DAO E Cadherin Elisa Kit Research Use Only Sandwich de la souris E

Souris E-Cadherin, E-DAO ELISA Kit

Ce kit d'ELISA emploie le sandwich-ELISA comme méthode. Le stripplate de Microelisa fourni dans ce kit a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps spécifique au l'E-DAO. Des normes ou les échantillons sont ajoutés aux puits appropriés de stripplate de Microelisa et ont combiné l'anticorps spécifique. Puis une peroxydase de raifort (HRP) - anticorps conjugué spécifique pour l'E-DAO est ajoutée chaque stripplate de Microelisa bien et incubée. Des composants libres sont enlevés. La solution de substrat de TMB est ajoutée chaque puits. Seulement ces puits qui contiennent l'E-DAO et l'anticorps E-DAO conjugué par HRP sembleront bleus en couleurs et puis tourneront jaune après l'addition de la solution d'arrêt. La densité optique (OD) est mesurée spectrophotométriquement une longueur d'onde de 450 nanomètre. La valeur d'OD est proportionnelle la concentration du l'E-DAO. Vous pouvez calculer la concentration du l'E-DAO dans les échantillons en comparant l'OD des échantillons la courbe standard.

Matériaux équipés de kit

Procédure

Dilution des normes

les puits 1.Ten sont placés pour des normes dans un stripplate de Microelisa. Dans bien 1 et bien 2, la solution étalon 100μl et le tampon standard de la dilution 50μl sont ajoutés et mélangés bien. Dans bien 3 et bien 4, la solution 100μl bien de 1 et bien 2 sont ajoutées respectivement. Le tampon standard de la dilution 50μl sont ajoutés et bien alors mélangés. la solution 50μl est jetée du puits 3 et bien 4. Dans bien 5 et bien 6, la solution 50μl bien de 3 et bien 4 sont ajoutées respectivement. Le tampon standard de la dilution 50μl sont ajoutés et bien alors mélangés. Dans bien 7 et bien 8, la solution 50μl bien de 5 et bien 6 sont ajoutées respectivement. Le tampon standard de la dilution 50μl sont ajoutés et bien alors mélangés. Dans bien 9 et bien 10, la solution 50μl bien de 7 et bien 8 sont ajoutées respectivement. Le tampon standard de la dilution 50μl sont ajoutés et bien alors mélangés. la solution 50μl est jetée du puits 9 et bien 10. Après dilution, tout le volume dans tous les puits sont 50μl et les concentrations sont 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml et 2ng/ml, respectivement.

2. Dans le stripplate de Microelisa, laissez un puits vide en tant que contrôle vide. Dans des puits témoin, le tampon de dilution de l'échantillon 40μl et l'échantillon 10μl sont ajoutés (le facteur de dilution est 5). Des échantillons devraient être chargés sur le fond sans toucher le mur bon. Mélangez bien la secousse douce.

3. Incubation : incubez la minute 30 37℃ après scellé avec la membrane de plat de fermeture.

4. Dilution : diluez le tampon de lavage concentré avec de l'eau distillée (30 fois pour 96T et 20 fois pour 48T).

5. Lavage : épluchez soigneusement la membrane de plat de fermeture, l'aspirez et la remplissez avec la solution de lavage. Jetez la solution de lavage après le repos pendant 30 secondes. Répétez la procédure de lavage pendant 5 fois.

6. Ajoutez le réactif de HRP-conjugué de 50 μl chaque puits excepté le contrôle vide bien.

7. Incubation comme décrit dans l'étape 3.

8. Lavage comme décrit dans l'étape 5.

9. Coloration : Ajoutez la solution A de chromogène de 50 μl et la solution B chaque puits, mélange de chromogène de 50 μl avec secouer doucement et incubez 37℃ pendant 15 minutes. Veuillez éviter la lumière pendant la coloration.

10. Arrêt : additionnez 50 que le μl cessent la solution chaque puits pour terminer la réaction. La couleur dans le puits devrait changer du bleu pour jaunir.

11. Absorbance lue O.D. 450nm utilisant un lecteur de plat de microtitre. La valeur d'OD du contrôle vide bien est placée en tant que zéro. L'analyse devrait être effectuée d'ici 15 minutes après s'être ajouté arrêtent la solution.

Précision

précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) : 3 échantillons avec le bas, moyen et de haut niveau E-DAO ont été examinés 20 fois d'un plat, respectivement.

précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) : 3 échantillons avec le bas, moyen et de haut niveau E-DAO ont été examinés de 3 plats différents, 8 répliques dans chaque plat.

Cv (%) = SD/meanX100

Intra-analyse : Cv<10>

Inter-analyse : Cv<12>

Chaîne d'analyse

0.6pg/ml -80pg/ml

Sensibilité :

0,1 pg/ml

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