• Préparer les réactifs: diluer 1 volume de tampon de lavage concentré (20×) avec 19 volumes d'eau distillée, bien mélanger.
• Ajoutez des échantillons: ouvrez la poche en feuille et retirez la microplate.distribuer 50 μL d'échantillon ou de contrôle négatif ou de contrôle positif aux puits respectifsIl vibre doucement la plaque.
• Incubation: couvrir la microplate avec le couvercle de la plaque et incuber la microplate revêtue dans un bain d'eau contrôlé par un thermostat ou dans un incubateur de microplate 37 °C pendant 60 minutes.
• Lavez la plaque: enlevez le couvercle de la plaque. aspirer le contenu de tous les puits. remplir les puits avec le tampon de lavage dilué (10 20 secondes pour tremper) puis aspirer nouveau.Répétez la procédure 5 fois.Assurez-vous que le volume de repos est minime en tapant sur une plaque de papier absorbant.
• Ajouter du conjugué: ajouter 100 μl de conjugué chaque puits (sauf pour le puits vide).
• Incubation: couvrir la microplate et incuber la plaque 37°C pendant 30 minutes.
• Lavez la plaque: Répétez la procédure de lavage comme l'étape 4.
• Ajouter du substrat: ajouter 50 μl de solution de substrat A et 50 μl de solution de substrat B chaque puits, bien mélanger, couvrir et incuber 37 °C pendant 30 minutes.
• Réaction d'arrêt: ajouter 50 μl de solution d'arrêt chaque puits, bien mélanger.
• Lire l'absorbance 450 nm. Si une mesure deux longueurs d'onde est utilisée, la longueur d'onde de référence doit être sélectionnée entre 620 nm et 690 nm.

Précautions prendre

• Laissez tous les composants du kit atteindre la température ambiante avant utilisation.
• Suivez strictement les instructions pour contrôler la température et le temps de réaction.
• Ne mélangez pas les composants de numéros de lot différents.
• Ne pas utiliser les composants du kit après leur date de péremption.