Kits diagnostiques vétérinaires PPRV ab ELISA Kit For Ovine de ruminants de Petits

Kits diagnostiques vétérinaires PPRV ab ELISA Kit For Ovine de ruminants de Petits

Virus de ruminants de DES Petits de Peste (PPRV) ab ELISA Kit pour 96 Wells/kits ovins

1. Utilisation

Il est employé pour détecter l'anticorps de PPRV dans le sérum et le plasma des moutons et de la chèvre qualitativement, pour évaluer le statut immunisé du vaccin de ruminants de petits de DES de Peste et le diagnostic sérologique aidé des animaux infectés.

2. Principe

Cette technique ELISA de concurrence d'utilisation de kit, antigène de PPRV est enduite d'un préenduisage sur les bandes micro-bien d'enzymes. En examinant, ajoutez l'échantillon dilué de sérum et conjugué monoclonal d'enzymes, après incubation, s'il y a anticorps spécifique de virus de PPR, il liera l'antigène de PPRV du plat de revêtement et empêchera l'anticorps monoclonal enzyme-marqué de lier l'antigène du plat ; réciproquement, si l'échantillon ne contient pas l'anticorps PPRV-spécifique, il ne liera pas au plat de revêtement. Après lavage pour enlever l'anticorps non lié et d'autres composants, ajoutez le substrat aux microwells pour former un produit bleu par la catalyse enzymatique. Après avoir ajouté la solution d'arrêt pour terminer la réaction, employez un lecteur de microplate la longueur d'onde du double 450nm/630nm pour mesurer l'absorbance une valeur dans la réaction bien.

3. Les composants de kit

4. Le matériel exigé pas a fourni

1) Micropipette : 0.5-10ul, 10ul-100ul, 100ul-1000ul.
2) astuces jetables de pipette.
3) diplômé : 500ml.
4) lecteur de Microplate : 96 puits avec la longueur d'onde 450/630nm.
5) eau distillée ou eau désionisée.
6) joint de Microplate

5. Préparation témoin

Prenez le sang total animal, obtiennent le sérum l'aide de la méthode régulière, le sérum si lumineux et aucun hemolysis.

6. Préparation de lavage de tampon

Le tampon de retour de lavage concentré par 10X dans la température ambiante avant emploi, s'il y a des cristaux de sel, l'a mis dedans au bain d'eau de 37 ℃ pour que 5~10min le dissolve, pour le diluer alors avec de l'eau désionisé 10 fois (par exemple, pour préparer le tampon de lavage 200ml : 180ml de l'eau désionisée + de 20ml de 10X a concentré le tampon de lavage, le mélange également). Le tampon de lavage dilué peut être stocké 4℃for au sujet d'une semaine.
 

7. Notes

1) Renvoyez tous les réactifs dans la température ambiante avant emploi, mettez tous les réactifs la température ambiante pendant au moins 30 minutes. Secouez elle également avant emploi, et le magasin de nouveau l'utilisation 2-8℃after.
2) ne mélangent pas des réactifs d'utilisation de différents kits et le no. différent de sort, empêchent les réactifs pollué en employant.
3) la solution de substrat et d'arrêt peut avoir l'irritation la peau et les yeux, fassent attention employer.
4) n'exposent pas le substrat la lumière forte et n'évitent pas le contact avec de l'oxydant.
5) le PPRV-AG a enduit des plats devrait être scellé et étanche l'humidité. Mettez le plat inutilisé arrière de MicroWell dans le sac sec d'aluminium et l'avez scellé au ℃ 2-8.
6) tous les déchets devraient être bien traités pour éviter la pollution avant le rejet.
7) la conformité stricte aux consignes d'utilisation peut obtenir les meilleurs résultats. Introduisant la pipette l'opération, la synchronisation, et le lavage du processus entier doivent être précis.

8. Procédure d'essais

1) Prenez le microplate enduit d'un préenduisage (selon le nombre d'échantillons, il peut être démonté et employé séparément), réglé 2 puits pour le contrôle positif, 2 puits pour le contrôle négatif, ajoutez le sérum positif du contrôle 50µl ou le sérum négatif de contrôle lui est bien en conséquence ; d'autres sont échantillon bien, ajouter premièrement la dilution de l'échantillon 40µl, puis ajoutent l'échantillon 10µl dans chaque puits. Enfin, ajoutez le conjugué des enzymes 50µl chaque puits, secouent doucement pour le mélanger également, couvrent le plat de feuille adhésive, incubent 37 minutes du ℃ for30 ;
2) ouvrent la feuille adhésive, jettent le liquide du puits, ajoutent le tampon dilué de lavage chaque puits, 300ul/well, soit statique pour 30s, jettent alors le liquide, répètent l'étape ci-dessus pendant 5 fois, enfin aileron de sécher avec le papier absorbant ;
3) ajoutent la solution de substrat, 100ul/well, la mélangent également puis pour la couvrir de feuille adhésive, incubent 37 minutes du ℃in darkfor15 ;
4) s'ajoutent cessent la solution 50ul/well pour arrêter la réaction, mesurent le résultat en 10 minutes.

9. Jugement de résultats

Lisez la valeur d'OD avec ELISA Reader 450nm (630nm comme référence).
Pour que l'analyse soit valide :
Valeur d'OD du contrôle négatif (N)≥1.0,
Valeur d'OD du contrôle positif (p) ≤0.3 ;
Calculez la méthode :
Valeur de valeur de l'échantillon OD/moyenne d'OD de valeur négative du contrôle (N)= S/N
Interprétation de résultats
S/N value≥0.5 : Négatif
Valeur de S/N<0>

10. Stockage et expirer date

Magasin 2~8℃ dans l'obscurité, aucun congelé, date d'échéance : 12 mois.

Symptômes cliniques

1. La plupart de type aigu

Il est commun dans les chèvres. Après une période d'incubation moyenne de 2 jours, la température corporelle atteint soudainement 40-41 degrés, ou même 42 degrés, avec la dépression, les cheveux de hérissement, et la perte ou la disparition de l'appétit. En même temps, il y a les larmes et du mucus nasal serous. Inflammation catarrhale de la bouche, parfois ulcération du mucosa, ou mort avant qu'il se produise. Cependant, l'hyperémie de la dent m est commune. Première constipation, puis diarrhée massive, mais aucun tabouret ensanglanté. Souffert de l'échec de moutons, de la baisse de la température et de la mort subite. Le cours de la maladie est de 5 6 jours, et le taux d'incidence est aussi haut que 100%. En cas de manifestations sérieuses, le taux de mortalité est 100% ; Dans des cas doux, le taux de mortalité ne dépasse pas 50%. La représentation de jeunes moutons est grave, avec le taux d'incidence et la mortalité élevés.

2. Type aigu

La période d'incubation est de 3 4 jours, et les symptômes sont identiques que les symptômes les plus aigus, mais le cours de la maladie est plus long, ainsi le jus nasal serous et visqueux se tourne vers mucopurulent, et les narines sont bientôt bloquées. Les muqueuses de la langue, de la joue, de la mchoire supérieure et du pharynx apparaissent ulcère. L se nécrose souvent la stomatite. Dans les cas doux, les petits foyers nécrotiques superficiels rouges apparaissent, et dans les cas graves, la cavité buccale entière est affectée. Les moutons malades ont soif et ne mangent pas. La diarrhée persistante de jet se produit. Si vous avez la respiration et la toux de difficulté, elle indique l'infection respiratoire. le Vaginal-vaginitis se produit souvent chez les brebis, accompagnées de sécrétion mucopurulent. Les moutons enceintes peuvent causer l'avortement. Le cours de la maladie est de 8-10 jours. Certains sont morts de la maladie concourante, une partie récupérée, et les autres sont devenus chroniques.

3. Type subaigu ou chronique

Il est commun après la phase aiguë. Les symptômes tôt sont identiques comme ci-dessus. Les nodules et les cicatrices purulentes autour de la bouche et les narines aussi bien que le collier inférieur sont les symptômes spéciaux de l'étape tardive de ce type, qui sont facilement confondus avec les cicatrices purulentes infectieuses. Le cours de la maladie est de 10-15 jours. Les moutons montrent généralement le processus subaigu, et récupèrent alors, ou ne montrent pas des symptômes.

Q1 : Combien de temps prendra-t-il pour que vous transportiez-vous ?
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