96 Test Kit de test ELISA pour la détection de kanamycine à haute reproductibilité

Kit de test ELISA de la kanamycine

Description du produit

REAGEN^TMLe kit de test ELISA de la kanamycine est un immunoassay enzymatique compétitif pour l'analyse quantitative de la kanamycine dans la viande/le foie/le rein, le lysate cellulaire, l'urine, le sérum et le lait.

Les caractéristiques uniques du kit sont:

• Des méthodes d'extraction récupération élevée (> 80%), rapides (10-40 minutes) et rentables.

• La limite de détection est de 0,2 ng/g.

• Une reproductibilité élevée.

• Un test ELISA rapide (moins d'une heure quel que soit le nombre d'échantillons).

Résumé de la procédure

La méthode est basée sur un test ELISA colorimétrique compétitif.l'échantillon et l'anticorps de kanamycine (anticorps n°1) et l'anticorps HRP-conjugué (anticorps HRP-conjugué n°2) sont ajoutés aux puits pour incubation.Si le résidu de kanamycine est présent dans l'échantillon, il sera en concurrence avec la kanamycine sur les plaques pour l'anticorps de kanamycine, l'anticorps secondaire, marqué avec une enzyme peroxidase,cible l'anticorps primaire qui est complexe au médicament recouvert sur les puits de plaqueL'intensité de couleur obtenue, après ajout du substrat HRP (TMB), a une relation inverse avec la concentration de résidus de kanamycine dans l'échantillon.

Contenu du kit, conservation et durée de conservation

REAGEN^TMLe kit de test ELISA de kanamycine est capable de réaliser 96 déterminations ou de tester 42 échantillons en double (en supposant 12 puits pour les normes).Retournez les puits non utilisés dans le sac en feuille et recouvrez-les avec le sécheur fourni dans l'emballage d'origine.La durée de conservation est de 12 mois lorsque le kit est correctement conservé.

Si vous ne prévoyez pas d' utiliser le kit pendant plus d' un mois, conservez Kanamycin Standard Stock, Anticorps Kanamycin #1 et Anticorps HRP-Conjugated #2 -20°C ou dans un congélateur.

Sensitivité (limite de détection)

Spécificité (réactivité croisée)

Matériaux nécessaires non fournis dans le kit

• Lecteur de plaque de microtiter (450 nm)

• Un mélangeur de tissus (par exemple, homogénéiseur Omni Tissue Master)

• Un mélangeur de vortex (par exemple, le mélangeur de vortex Genie de VWR)

• 10, 20, 100 et 1000 IU de pipettes

• Pipette multicanaux: 50 300 UL (facultatif)

Avertissements et précautions

• Les standards contiennent de la kanamycine.
• Ne pas utiliser après la date de péremption.
• Ne mélangez pas les réactifs provenant de différents kits ou lots, sauf pour les composants ayant le même numéro de pièce dans leur date de péremption.
• Essayez de maintenir une température de laboratoire de 20 °C 25 °C (68 °F 77 °F). Évitez d'exécuter des essais sous ou près des conduits d'aération, car cela peut provoquer un refroidissement, une chauffage et/ou une évaporation excessifs.ne pas effectuer les essais en plein soleil, car cela peut provoquer une chaleur et une évaporation excessives.Il convient d'éviter les bancs froids en plaçant plusieurs couches de serviettes en papier ou d'autres matériaux isolants sous les plaques d'essai pendant l'incubation..
• Veillez n'utiliser que de l'eau distillée ou désionisée, car la qualité de l'eau est très importante.
• Lorsque des échantillons ou des réactifs sont mis en pipette dans une plaque de microtiter vide, les extrémités de la pipette sont placées dans le coin inférieur du puits, en contact avec le plastique.
• L'incubation des plaques d'essai doit être chronométrée le plus précisément possible. Soyez cohérent lors de l'ajout de normes la plaque d'essai. Ajoutez d'abord vos normes, puis vos échantillons.
• Ajouter des normes la plaque uniquement dans l'ordre de faible concentration haute concentration, car cela minimisera le risque de compromettre la courbe standard.
• Les plaques doivent toujours être réfrigérées dans des sacs scellés avec un sécheur pour maintenir leur stabilité.Prévenir la formation de condensation sur les plaques en leur permettant de s' équilibrer température ambiante (20°C / 68°F) pendant l' emballage.

Assurez-vous que les échantillons sont correctement conservés. En général, les échantillons doivent être réfrigérés 2 4 °C pendant un maximum de 1 2 jours. Congelez les échantillons au moins -20 °C s'ils doivent être conservés plus longtemps.Les échantillons surgelés peuvent être décongelés température ambiante (20°C / 68°F) ou au réfrigérateur avant utilisation..

• Préparation de 1 × diluant d'échantillon:Mélanger 1 volume de 10 × diluant d'échantillon avec 9 volumes d'eau distillée.
• Préparation de 1 foisPuffer extérieur de l'échantillon:Mélanger 1 volume de tampon 10×échantillon Ext. avec 9 volumes d'eau distillée.

Lysate cellulaire

• Prenez 100 I.U. de lysate cellulaire, ajoutez 900 I.U. de tampon diluant 1 × échantillon, mélangez bien.

• Centrifugez pendant 5 minutes 4000 x g.

• Prenez 50 I.U. de supernatant par puits pour l'analyse.

Nom de l'organisme: Facteur de dilution: 10.

Réchappés/Pêche/Viande/Fivre/Rinces

• 1,0 g de l'échantillon homogénéisé, ajouter 4,0 ml de tampon 1×échantillon étendu,

• Vortex l'échantillon pendant 1 minute avec le mélangeur de vortex.

• Centrifiez l'échantillon pendant 5 minutes 4 000 x g.

• Transférer soigneusement 200 uL de la couche supérieure dans un nouveau tube,ajouter 1.375 ml de diluant d'échantillon 1X et 25 uL de tampon d'équilibre d'échantillon, tourbillonnent pendant 30 secondes.

• Utilisez 50 uL par puits pour l'analyse.

Nom de l'entreprise: Facteur de dilution: 40.

Urine/sérum

• Prenez 50 uL d'urine ou d'échantillon de sérum, ajoutez 1,2 mL de diluant 1X échantillon, mélangez bien.

• Centrifugez pendant 5 minutes 4 000 x g.

• Prenez 50 uL de supernatant par puits pour l'analyse.

Nom de l'organisme: Facteur de dilution: 25.

Le lait

• Ajouter 100 litres d'échantillon de lait dans un tube de centrifugeuse, ajouter 900 litres de diluant d'échantillon.
• Vortex vigoureux pendant 30 secondes.
• Centrifugez 4 000 x g pendant 10 minutes.
• Utilisez 50 uL de l'échantillon de surnaturant pour l'analyse.

Nom de l'organisme: Facteur de dilution:10

Protocole du kit de test de la kanamycine ELISA

Préparation du réactif

IMPORTANT: tous les réactifs doivent être amenés température ambiante avant utilisation (1 2 heures 20 ¢ 25- Je ne sais pas.C / 68 ¢ 77- Je ne sais pas.F); Veillez lire la section " Avertissements et précautions " sur le site Web de l'Agence.page3.Les solutions doivent être préparées juste avant le test ELISA. Tous les réactifs doivent être mélangés en inversant ou en faisant tourner doucement avant utilisation. Préparez les volumes nécessaires pour le nombre de puits en cours d'exécution.Ne remettez pas les réactifs dans les tubes/bouteilles d'origineL'utilisation de réservoirs jetables lors de la manipulation des réactifs peut minimiser le risque de contamination et est recommandée.

• Préparation de la solution de lavage 1X

Mélanger 1 volume de solution de lavage 20X avec 19 volumes d'eau distillée.

Protocole d'essai ELISA

Étiqueter les bandes individuelles qui seront utilisées et les réactifs aliquotés comme suit:

• Ajouter 50 I.U. de chaque norme de kanamycine en double dans différents puits (ajouter des normes la plaque uniquement dans l'ordre de faible concentration haute concentration).

• Ajouter 50 litres de chaque échantillon en double dans des puits d'échantillonnage différents.

• Ajoutez 50 I.U. d'Abside HRP-conjugué 2 chaque puits et 50 I.U. d'Anticorps de Kanamycine 1 chaque puits. Mélangez bien en agitant doucement la plaque manuellement pendant 30 secondes.

• Incuber la plaque pendant 30 minutes température ambiante (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F). (Évitez la lumière directe du soleil et les bancs froids pendant l'incubation.

• Lavez la plaque 4 fois avec 250 I.L. de solution de lavage 1X. Après le dernier lavage, inverser la plaque et secouer doucement la plaque sur des serviettes en papier (Faites l'étape suivante immédiatement après le lavage des plaques.Ne laissez pas la plaque sécher l'air libre entre les étapes de travail).

• Ajoutez 100 I.L. de substrat TMB. Tempérez la réaction immédiatement après l'ajout du substrat. Mélangez la solution en secouant doucement la plaque manuellement pendant 30 s pendant l'incubationNe remettez aucun substrat dans le récipient d'origine afin d'éviter toute contamination potentielle. Toute solution de substrat présentant une coloration indique une détérioration et doit être jetée.Il est recommandé de couvrir la plaque de microtiter pendant l'incubation).

• Après incubation pendant 15 minutes température ambiante (20 ¢ 25- Je ne sais pas.C / 68 ¢ 77- Je ne sais pas.F), ajouter 100 I.U. de tampon stop pour arrêter la réaction enzymatique.

• Lire la plaque dès que possible après l'ajout du tampon d'arrêt sur un lecteur de plaque longueur d'onde de 450 nm (avant la lecture,utiliser une lingette sans peluche sur le fond de la plaque pour s'assurer que l'humidité ou les empreintes digitales n'interfèrent pas avec les relevés).

Calculs de la concentration de kanamycine

Une courbe standard peut être construite en représentant sur une courbe logarithmique l'absorbance relative moyenne (%) obtenue partir de chaque norme de référence par rapport sa concentration en ng/mL.

Absorbance relative (%) =norme d'absorption zéroou échantillon x 100

Utiliser les valeurs moyennes relatives d'absorbance pour chaque échantillon afin de déterminer la concentration correspondante du médicament testé en ng/ml partir de la courbe standard.

La figure suivante est une courbe standard typique du chloramphénicol.