Échantillons rapides d'exsudat de lésion de sérum de Kit Real Time For Human d'essai d'ACP de virus de Monkeypox

Spécifications

PROCÉDURES

1. Préparations témoin
L'extraction d'ADN partir des échantillons cliniques est conduite selon les conditions et les procédures correspondantes dans le kit d'extraction d'ADN de virus. Extrait

L'ADN peut être directement employée pour la détection. Si l'échantillon n'est pas détecté juste après l'extraction, il devrait être stocké -70°C pour le remplaçant, évitant les cycles gel-dégel répétés.

2. Préparation de système de réaction
(1) préparation de système : Sortez le réactif du kit, et permettez-lui de dégeler complètement la température ambiante. Inversez le mélange et la centrifugeuse immédiatement. Réactions d'essai de N (N = nombre d'échantillons examiner + contrôle positif + contrôle négatif + 1) sont préparés pour des systèmes de réaction, respectivement, comme suit.

(2) distribution de système de réaction : Mélangez bien le tampon ci-dessus de réaction, centrifugeuse, et distribuez 15μL des parties aliquotes dans des tubes d'ACP appropriés l'instrument fluorescent d'ACP. (Centrifugez les tubes d'ACP 6,000rpm pour que 30s et transport prélève la zone de traitement.)

3. Chargement d'échantillon (zone de traitement d'échantillon)
Ajoutez l'échantillon 10μL acide nucléique, le contrôle négatif et le contrôle positif aux tubes ci-dessus d'ACP respectivement. Couvrez les tubes étroitement et la centrifugeuse 6,000rpm pour 10s et puis le transport la zone d'amplification d'ACP.
* précaution : Ajouter des échantillons dans l'ordre suivant est
a recommandé : échantillon acide nucléique de control-> négatif - > contrôle positif.
 

4. Amplification d'ACP (zone d'amplification d'ACP)
4,1 mettez les tubes caped d'ACP dans la machine en temps réel d'ACP pour l'amplification.
4,2 arrangement d'état de cycle d'ACP de fluorescence

Rassemblez les signaux fluorescents au ℃ de 3:60 d'étape ; 35s pour ABI 7500, 20s pour SLAN-96S/96P, tandis que 13s pour d'autres systèmes en temps réel d'ACP. Tout le volume : 25μL.

4,3 disposition après détection
Disposez les tubes d'ACP dans un sac scellé après la réaction et traitez les tubes utilisés en tant que déchets médicaux.
 

5. Arrangements pour l'analyse de résultat
Placez la ligne de base une région avant l'amplification exponentielle où les signaux fluorescents de tous les échantillons sont relativement stables (aucune fluctuations significatives dans tous les échantillons) ; placez le point de départ (nombre de cycle) partir des fluctuations de signal commencer
phase de collection de fluorescence ; placez le point final (nombre de cycle) 1~3 cycles avant le Ct du premier échantillon pour écrire l'amplification exponentielle. 4~15 cycles sont recommandés.
Placez le juste de seuil au-dessus du point le plus élevé de la courbe négative d'amplification de contrôle (courbe irrégulière de bruit).
 

6. Critères de contrôle de qualité
Avant d'évaluer les résultats de spécimen, le contrôle positif et le contrôle négatif devraient être interprétés utilisant la table d'interprétation ci-dessous, et le contrôle positif et la courbe négative de contrôle doivent être exécutés correctement, autrement le résultat d'échantillon est invalide.

7. Interprétation des résultats d'essai
Des canaux de FAM pour le virus de Monkeypox, résultat de détection devraient être interprétés en tant que ci-dessous.
a) positif : Le ≤ 38 de Ct et la courbe d'amplification est en forme de s.
b) a suspecté : 38 < Ct=""> 40 ou ≤ nul de Ct et de Ct 35 dans le canal de VIC pour le deuxième essai.
c) négatif : Ct > 40 ou ≤ nul de Ct et de Ct 35 dans le canal de VIC.
d) contre-essai : Ct > 40 ou Ct nul et Ct > 35 dans le canal de VIC.