La haute souris de Sensitivie a adapté de bêtas-defensin 4 puits aux besoins du client du kit 96 de DEFB4 ELISA
Cat.No E1204Mo
Chaîne standard de courbe : 0.05ng/ml - 10ng/ml
Sensibilité : 0.021ng/ml
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de la souris bêtas-defensin 4 (également connu comme DEFB4) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps de la souris DEFB4. DEFB4 présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated de la souris DEFB4 est ajouté et lie à DEFB4 dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated DEFB4. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité de la souris DEFB4. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (12.8ng/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une solution de l'action standard 6.4ng/ml. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2 de la solution d'action standard (6.4ng/ml) avec le diluant standard pour produire les solutions 3.2ng/ml, 1.6ng/ml, 0.8ng/ml et 0.4ng/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/ml). Toute solution restante devrait être gelée à -20°C et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :
| 6.4ng/ml |
No.5 standard |
diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
| 3.2ng/ml |
No.4 standard |
120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
| 1.6ng/ml |
No.3 standard |
120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
| 0.8ng/ml |
No.2 standard |
120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
| 0.4ng/ml |
No.1 standard |
120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
| Concentration standard |
No.5 standard |
No.4 standard |
No.3 standard |
No.2 standard |
No.1 standard |
| 12.8ng/ml |
6.4ng/ml |
3.2ng/ml |
1.6ng/ml |
0.8ng/ml |
0.4ng/ml |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anticorps de 10μl anti-DEFB4 aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.
Références
Kolar S.S., Baidouri H., Hanlon S., McDermott heure du matin.
Infectez. Immun. 81:2669- 2677(2013)
