96 kit de Sensitivie DEFB4 ELISA de souris de puits haut
Cat.No E1204Mo
Chaîne standard de courbe : 0.05ng/ml - 10ng/ml
Sensibilité : 0.021ng/ml
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise de la souris bêtas-defensin 4 (également connu comme DEFB4) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps de la souris DEFB4. DEFB4 présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated de la souris DEFB4 est ajouté et lie à DEFB4 dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated DEFB4. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité de la souris DEFB4. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 t/mn à 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et à peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez à 2-8°C ou gelez à la centrifugeuse de -20°C. à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Notez
Des concentrations d'échantillon devraient être prévues avant d'être employée dans l'analyse. Si la concentration d'échantillon n'est pas dans la marge de la courbe standard, les utilisateurs doivent nous contacter pour déterminer l'échantillon optimal pour leurs expériences particulières.
Des échantillons à employer d'ici 5 jours devraient être stockés aux échantillons 2-8°C. devraient aliquoted ou doivent être stockés à -20°C dans un délai de 1 mois ou à -80°C dans les 6 mois. Avoid a répété les cycles gel-dégel.
Des échantillons devraient être apportés à la température ambiante avant de commencer l'analyse.
Centrifugeuse pour rassembler l'échantillon avant emploi.
Des échantillons contenant NaN3 ne peuvent pas être examinés pendant qu'il empêche l'activité de la peroxydase (HRP) de raifort sauvage.
Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.
* l'échantillon ne peut pas être dilué avec ce kit. En raison le du matériel nous employons pour préparer le kit, l'interférence de matrice témoin peut faussement diminuer la spécificité et l'exactitude de l'analyse.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (12.8ng/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une solution de l'action standard 6.4ng/ml. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2 de la solution d'action standard (6.4ng/ml) avec le diluant standard pour produire les solutions 3.2ng/ml, 1.6ng/ml, 0.8ng/ml et 0.4ng/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/ml). Toute solution restante devrait être gelée à -20°C et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :
| 6.4ng/ml | No.5 standard | diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
| 3.2ng/ml | No.4 standard | 120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
| 1.6ng/ml | No.3 standard | 120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
| 0.8ng/ml | No.2 standard | 120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
| 0.4ng/ml | No.1 standard | 120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
| Concentration standard | No.5 standard | No.4 standard | No.3 standard | No.2 standard | No.1 standard |
| 12.8ng/ml | 6.4ng/ml | 3.2ng/ml | 1.6ng/ml | 0.8ng/ml | 0.4ng/ml |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.
Résumé
- Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.
- Ajoutez le réactif suffisant et d'ELISA dans chacun bien. Incubez pour 1 heure à 37°C.
Lavez le plat 5 fois.
Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes à 37°C.
Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.
Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.
Références
Rivas-Santiago B., Sada E., Tsutsumi V., Aguilar-Léon D., Contreras J.L., Hernandez-Pando R.
J. Infect. DIS. 194:697- 701(2006)
