spécificité et sensibilité de kit de Ghrelin GHRL ELISA du rat 96wells
Cat.No E0896Ra
Chaîne standard de courbe : 40ng/L - 12000ng/L
Sensibilité : 20.56ng/L
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois échantillons de concentration connue ont été examinées dans des analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : CV<8%
Inter-analyse : CV<10%
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise du rat Ghrelin (également connu sous le nom de GHRL) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps du rat GHRL. GHRL présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated du rat GHRL est ajouté et lie à GHRL dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated GHRL. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité du rat GHRL. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 t/mn à 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et à peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez à 2-8°C ou gelez à la centrifugeuse de -20°C. à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (12800ng/L) avec 120μl du diluant standard pour produire d'une solution d'action standard 6400ng/L. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série la solution d'action standard (6400ng/L) 1:2 avec le diluant standard pour produire solutions 3200ng/L, 1600ng/L, 800ng/L et 400ng/L. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/L). Toute solution restante devrait être gelée à -20°C et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :
| 6400ng/L |
No.5 standard |
diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
| 3200ng/L |
No.4 standard |
120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
| 1600ng/L |
No.3 standard |
120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
| 800ng/L |
No.2 standard |
120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
| 400ng/L |
No.1 standard |
120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
| Concentration standard |
No.5 standard |
No.4 standard |
No.3 standard |
No.2 standard |
No.1 standard |
| 12800ng/L |
6400ng/L |
3200ng/L |
1600ng/L |
800ng/L |
400ng/L |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.
Résumé
- Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.
- Ajoutez l'échantillon et le réactif d'ELISA dans chacun bien. Incubez pour 1 heure à 37°C.
-
Lavez le plat 5 fois.
-
Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes à 37°C.
-
Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.
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Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.
Références
Wei W., Wang G., Qi X., Anglais E.W., Greeley G.H. Jr
Endocrinologie 146:1611- 1625(2005)
