Kit canin d'Osteocalcin ELISA avec haut Spesificity et sensibilité
Cat.No E0146Ca
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps canin d'OT. OT présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps canin alors biotinylated d'OT est ajouté et lie à OT dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated OT. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité d'OT canin. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Réactif fourni
| Composants |
Quantité |
|
Solution étalon (24ng/ml)
|
0.5ml x1 |
| Plat enduit d'un préenduisage d'ELISA |
12 * 8 bandes bonnes x1 |
| Diluant standard |
3ml x1 |
| Streptavidin-HRP |
6ml x1 |
| Arrêtez la solution |
6ml x1 |
| Solution A de substrat |
6ml x1 |
| Solution B de substrat |
6ml x1 |
| Concentré de tampon de lavage (30x) |
20ml x1 |
| Anticorps canin de Biotinylated OT |
1ml x1 |
| Instruction d'utilisateur |
1 |
| Scelleur de plat |
PICS 2 |
| Sac de tirette |
1 PIC |
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 t/mn à 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et à peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez à 2-8°C ou gelez à la centrifugeuse de -20°C. à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (24ng/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une solution de l'action standard 12ng/ml. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2 de la solution d'action standard (12ng/ml) avec le diluant standard pour produire les solutions 6ng/ml, 3ng/ml, 1.5ng/ml et 0.75ng/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/ml). Toute solution restante devrait être gelée à -20℃ et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :
| 12ng/ml |
No.5 standard |
diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
| 6ng/ml |
No.4 standard |
120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
| 3ng/ml |
No.3 standard |
120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
| 1.5ng/ml |
No.2 standard |
120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
| 0.75ng/ml |
No.1 standard |
120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
| Concentration standard |
No.5 standard |
No.4 standard |
No.3 standard |
No.2 standard |
No.1 standard |
| 24ng/ml |
12ng/ml |
6ng/ml |
3ng/ml |
1.5ng/ml |
0.75ng/ml |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.
Références
[1" expression de haut niveau dans Escherichia coli d'hormone de croissance bovine biologiquement active. « George H.J., L'Italien J.J., Pilacinski W.P., Glassman D.L., Krzyzek R.A.DNA 4:273- 281(1985)
