Le haut kit sensible humain du sandwich ELISA au cytochrome P450 1A2 a adapté le kit aux besoins du client de CYP1A2 ELISA
Cat.No E2281Hu
Chaîne standard de courbe : 10ng/L - 2000ng/L
Sensibilité : 5.15ng/L
Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
le produit de *This sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anticorps de 10μl anti-CYP1A2 aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.
Résumé
1. Préparez tous les réactifs, échantillons et normes.
2. Ajoutez l'échantillon et le réactif d'ELISA dans chacun bien. Incubez pour 1 heure à 37°C.
3. Lavez le plat 5 fois.
4. Ajoutez la solution A et B. Incubate de substrat pendant 10 minutes à 37°C.
5. Ajoutez arrêtent la solution et la couleur se développe.
6. Lisez la valeur d'OD d'ici 10 minutes.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois échantillons de concentration connue ont été examinées dans des analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : Cv<8>
Inter-analyse : Cv<10>
Principe d'analyse
Ce kit d'elisa de sandwich est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps CYP1A2 humain. CYP1A2 présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps CYP1A2 humain alors biotinylated est ajouté et lie à CYP1A2 dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated CYP1A2. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité de CYP1A2 humain. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (2400ng/L) avec 120μl du diluant standard pour produire d'une solution d'action standard 1200ng/L. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série la solution d'action standard (1200ng/L) 1:2 avec le diluant standard pour produire solutions 600ng/L, 300ng/L, 150ng/L et 75ng/L. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/L). Toute solution restante devrait être gelée à -20°C et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :
| 1200ng/L |
No.5 standard |
diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
| 600ng/L |
No.4 standard |
120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
| 300ng/L |
No.3 standard |
120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
| 150ng/L |
No.2 standard |
120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
| 75ng/L |
No.1 standard |
120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
| Concentration standard |
No.5 standard |
No.4 standard |
No.3 standard |
No.2 standard |
No.1 standard |
| 2400ng/L |
1200ng/L |
600ng/L |
300ng/L |
150ng/L |
75ng/L |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 25x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.
Calcul de résultat
Construisez une courbe standard en traçant l'OD moyen pour chacun standard sur (y) l'axe vertical contre la concentration sur (x) l'axe horizontal et dessinez une courbe de l'ajustement normal par les points sur le graphique. Ces calculs peuvent mieux être exécutés avec le logiciel sur ordinateur de courbe-montage et la ligne de l'ajustement normal peut être déterminée par analyse de régression.
