Kit de test ELISA Cytochrome P450 1A2 humain de type sandwich avec une forte sensibilité et spécificité Cat.No E 2281Hu
Taille : 96 puits
Gamme de courbe standard : 10ng / L - 2000ng / L
Sensibilité : 5,15 ng / L
* Ce produit est destiné à la recherche uniquement et non à une utilisation dans les procédures de diagnostic. Il est fortement recommandé de lire entièrement ces instructions avant utilisation.
Collection d'échantillons
Sérum Laisser le sérum coaguler pendant 10 à 20 minutes à température ambiante. Centrifuger à 2000-3000 tr / min pendant 20 minutes.
Plasma Recueillir le plasma en utilisant de l'EDTA ou de l'héparine comme anticoagulant. Centrifuger les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 tr / min entre 2 et 8 ° C dans les 30 minutes suivant le prélèvement.
Recueil d'urine par tube stérile. Centrifuger à 2000-3000 tr / min pendant environ 20 minutes. Lors de la collecte de liquide pleuropéritonéal et de liquide céphalo-rachidien, veuillez suivre les procédures susmentionnées.
Cell C ulture S upernatant Recueillir par des tubes stériles lors de l'examen des composants sécrétés . Centrifuger à 2000-3000 tr / min pendant environ 20 minutes. Recueillir soigneusement les surnageants. Lors de l'examen des composants à l'intérieur de la cellule, utilisez du PBS (pH 7,2-7,4) pour diluer la suspension cellulaire à la concentration cellulaire d'environ 1 million / ml. Endommager les cellules par des cycles répétés de gel-dégel pour laisser sortir les composants intérieurs. Centrifuger à 2000-3000 tr / min pendant environ 20 minutes.
Tissus et autres fluides corporels Rincer les tissus dans du PBS (pH 7,4) pour éliminer soigneusement l'excès de sang et peser avant l'homogénéisation. Hacher les tissus et les homogénéiser dans du PBS (pH7,4) avec un homogénéisateur en verre sur glace. Décongeler à 2-8 ° C ou congeler à -20 ° C. Centrifuger à 2000-3000 tr / min pendant environ 20 minutes.
Remarque
- Les concentrations des échantillons doivent être prédites avant d'être utilisées dans le test. Si la concentration de l'échantillon n'est pas dans la plage de la courbe standard, les utilisateurs doivent nous contacter pour déterminer l'échantillon optimal pour leurs expériences particulières.
- Les échantillons à utiliser dans les 5 jours doivent être conservés à 2-8 ° C. Les échantillons doivent être aliquotés ou doivent être conservés à -20 ° C en 1 mois ou à -80 ° C en 6 mois. Évitez les cycles de gel-dégel répétés.
- Les échantillons doivent être amenés à température ambiante avant de commencer le test.
- Centrifuger pour recueillir l'échantillon avant utilisation.
- Les échantillons contenant du NaN3 ne peuvent pas être testés car il inhibe l'activité de la peroxydase de raifort (HRP).
- Recueillir soigneusement les surnageants. Lorsque des sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation doit être effectuée à nouveau.
- L'hémolyse peut grandement influer sur la validité des résultats des tests. Prenez soin de minimiser l'hémolyse.
* Beaucoup ne peut pas être dilué avec ce kit. En raison du matériel que nous utilisons pour préparer le kit, l'interférence de la matrice d'échantillon peut faussement déprimer la spécificité et la précision du test.
Principe du test
Ce kit sandwich elisa est un dosage immuno-enzymatique (ELISA). La plaque a été pré-enduite d'anticorps humain CYP1A2. Le CYP1A2 présent dans l'échantillon est ajouté et se lie aux anticorps enrobés sur les puits. Et puis l'anticorps humain CYP1A2 biotinylé est ajouté et se lie au CYP1A2 dans l'échantillon. Ensuite, la streptavidine-HRP est ajoutée et se lie à l'anticorps CYP1A2 biotinylé. Après incubation, la streptavidine-HRP non liée est éliminée par lavage pendant une étape de lavage. Une solution de substrat est ensuite ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité de CYP1A2 humain. La réaction est terminée par l'addition d'une solution d'arrêt acide et l'absorbance est mesurée à 450 nm.
Utilisation conforme
Ce kit sandwich est destiné à la détection quantitative précise du Cytochrome P450 1A2 humain (également connu sous le nom de CYP1A2) dans le sérum, le plasma, les surnageants de culture cellulaire, les lysats cellulaires, les homogénats tissulaires.
Réactif fourni
| Composants | Quantité |
| Solution standard (2400ng / L) | 0,5 ml x1 |
| Plaque ELISA pré-enduite | Bandes 12 * 8 puits x1 |
| Diluant standard | 3ml x1 |
| Streptavidine-HRP | 6ml x1 |
| Solution d'arrêt | 6ml x1 |
| Solution de substrat A | 6ml x1 |
| Solution de substrat B | 6ml x1 |
| Concentré de tampon de lavage (25x) | 20 ml x1 |
| Anticorps humain CYP1A2 biotinylé | 1 ml x1 |
| Instruction utilisateur | 1 |
| Scellant à plaques | 2 photos |
| Sac à fermeture éclaire | 1 photo |
Précautions
- Avant utilisation, le kit sandwich elisa et l'échantillon doivent être réchauffés naturellement à température ambiante 30 minutes.
- Cette instruction doit être strictement suivie dans l'expérience.
- Une fois le nombre de bandes souhaité retiré, refermez immédiatement le sac pour protéger les restes de la détérioration. Couvrir tous les réactifs lorsqu'ils ne sont pas utilisés.
- Assurez-vous que l'ordre de pipetage et le taux d'addition de puits à puits lors du pipetage des réactifs.
- Les embouts de pipette et le scellant pour plaques à la main doivent être propres et jetables pour éviter la contamination croisée.
- Évitez d'utiliser les réactifs de différents lots ensemble.
- La solution de substrat B est sensible à la lumière, n'exposez pas la solution de substrat B à la lumière pendant une longue période.
- La solution d'arrêt contient de l'acide. Veuillez porter une protection pour les yeux, les mains et la peau lorsque vous utilisez ce matériau. Évitez le contact de la peau ou des muqueuses avec le réactif du kit.
- Le kit sandwich elisa ne doit pas être utilisé au-delà de la date d'expiration.
Procédure de dosage
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme indiqué. Amener tous les réactifs à température ambiante avant utilisation. Le dosage est effectué à température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandelettes nécessaires pour le test. Insérez les bandes dans les cadres à utiliser. Les bandelettes non utilisées doivent être conservées entre 2 et 8 ° C.
3. Ajoutez 50 μl de standard au puits standard. Remarque : N'ajoutez pas bien l'anticorps au standard car la solution standard contient un anticorps biotinylé.
4. Ajouter 40 μl d'échantillon aux puits d'échantillonnage, puis ajouter 10 μl d'anticorps anti-CYP1A2 aux puits d'échantillonnage, puis ajouter 50 μl de streptavidine-HRP aux puits d'échantillonnage et aux puits standard (pas de puits témoin à blanc). Bien mélanger. Couvrir la plaque avec un scellant. Incuber 60 minutes à 37 ° C.
5. Retirez le scellant et lavez la plaque 5 fois avec un tampon de lavage. Faire tremper les puits avec au moins 0,35 ml de tampon de lavage pendant 30 secondes à 1 minute pour chaque lavage. Pour le lavage automatisé, aspirer tous les puits et laver 5 fois avec du tampon de lavage, en remplissant les puits avec du tampon de lavage. Tamponnez la plaque sur du papier absorbant ou tout autre matériau absorbant.
6. Ajouter 50 µl de solution de substrat A à chaque puits, puis ajouter 50 µl de solution de substrat B à chaque puits. Incuber la plaque recouverte d'un nouveau scellant pendant 10 minutes à 37 ° C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50 μl de solution d'arrêt à chaque puits, la couleur bleue deviendra immédiatement jaune.
8. Déterminer immédiatement la densité optique (valeur DO) de chaque puits à l'aide d'un lecteur de microplaques réglé à 450 nm dans les 10 menuets après l'ajout de la solution d'arrêt.
