Haut rat Galectin de spécificité et de précision 3 puits du kit 96 de GAL3 ELISA
Cat.No E1533Ra
Chaîne standard de courbe : 0.05ng/ml - 20ng/ml
Sensibilité : 0.023ng/ml
Taille : 96 puits
Stockage : Stockez les réactifs à 2-8°C. pour le stockage de six mois fini se rapportent à la date d'échéance le gardent aux cycles de dégel répétés Avoid de -20°C. Si différents réactifs sont ouverts on lui recommande que le kit soit employé dans un délai de 1 mois.
* ce produit sert pour l'usage de recherches seulement, pas des procédures de diagnostic. Il est recommandent fortement de lire cette instruction entièrement avant emploi.
Précision
La précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) trois échantillons de concentration connue ont été examinées d'un plat pour évaluer la précision d'intra-analyse.
La précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) trois échantillons de concentration connue ont été examinées dans des analyses distinctes pour évaluer la précision d'inter-analyse.
Cv (%) = SD/mean X 100
Intra-analyse : Cv<8>
Inter-analyse : Cv<10>
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise du rat Galectin 3 (également connu sous le nom de GAL-3) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps du rat GAL-3. GAL-3 présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated du rat GAL-3 est ajouté et lie à GAL-3 dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie au Biotinylated GAL-3antibody. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité du rat GAL-3. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 t/mn à 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et à peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez à 2-8°C ou gelez à la centrifugeuse de -20°C. à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Notez
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Des concentrations d'échantillon devraient être prévues avant d'être employée dans l'analyse. Si la concentration d'échantillon n'est pas dans la marge de la courbe standard, les utilisateurs doivent nous contacter pour déterminer l'échantillon optimal pour leurs expériences particulières.
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Des échantillons à employer d'ici 5 jours devraient être stockés aux échantillons 2-8°C. devraient aliquoted ou doivent être stockés à -20°C dans un délai de 1 mois ou à -80°C dans les 6 mois. Avoid a répété les cycles gel-dégel.
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Des échantillons devraient être apportés à la température ambiante avant de commencer l'analyse.
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Centrifugeuse pour rassembler l'échantillon avant emploi.
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Des échantillons contenant NaN3 ne peuvent pas être examinés pendant qu'il empêche l'activité de la peroxydase (HRP) de raifort sauvage.
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Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.
* l'échantillon ne peut pas être dilué avec ce kit. En raison le du matériel nous employons pour préparer le kit, l'interférence de matrice témoin peut faussement diminuer la spécificité et l'exactitude de l'analyse.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anticorps de 10μl anti-GAL-3 aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.
Calcul de résultat
Construisez une courbe standard en traçant l'OD moyen pour chacun standard sur (y) l'axe vertical contre la concentration sur (x) l'axe horizontal et dessinez une courbe de l'ajustement normal par les points sur le graphique. Ces calculs peuvent mieux être exécutés avec le logiciel sur ordinateur de courbe-montage et la ligne de l'ajustement normal peut être déterminée par analyse de régression.
Références
Walther M., Kuklinski S., Pesheva P., Guntinas-Lichius O., Angelov D.N., Neiss W.F., Asou H., Probstmeier R.
J. Neurosci. Recherche. 61:430- 435(2000)
