Kit d'Osteopontin ELISA de lapin avec haut Spesificity et sensibilité
Cat.No. E0193R b
Utilisation prévue
Ce kit de sandwich est pour la détection quantitative précise du lapin Osteopontin (également connu sous le nom d'OPN) en sérum, plasma, surnageants de culture cellulaire, lysates de cellules, homogénats de tissu.
Principe d'analyse
Ce kit est une analyse Enzyme-liée d'immunosorbant (ELISA). Le plat a été enduit d'un préenduisage avec de l'anticorps du lapin OPN. OPN présentent dans l'échantillon sont ajoutés et lient aux anticorps enduits sur les puits. Et l'anticorps alors biotinylated du lapin OPN est ajouté et lie à OPN dans l'échantillon. Alors Streptavidin-HRP est ajouté et lie à l'anticorps de Biotinylated OPN. Après incubation Streptavidin-HRP défait est enlevé pendant une étape de lavage. La solution de substrat est alors ajoutée et la couleur se développe proportionnellement à la quantité de lapin OPN. La réaction est terminée par l'addition d'acide arrêtent la solution et l'absorbance est mesurée à 450 nanomètre.
Réactif fourni
| Composants |
Quantité |
| Solution étalon (160ng/ml) |
0.5ml x1 |
| Plat enduit d'un préenduisage d'ELISA |
12 * 8 bandes bonnes x1 |
| Diluant standard |
3ml x1 |
| Streptavidin-HRP |
6ml x1 |
| Arrêtez la solution |
6ml x1 |
| Solution A de substrat |
6ml x1 |
| Solution B de substrat |
6ml x1 |
| Concentré de tampon de lavage (30x) |
20ml x1 |
| Anticorps du lapin OPN de Biotinylated |
1ml x1 |
| Instruction d'utilisateur |
1 |
| Scelleur de plat |
PICS 2 |
| Sac de tirette |
1 PIC |
Collection de spécimen
Le sérum permettent au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant 20 minutes.
Le plasma rassemblent le plasma utilisant l'EDTA ou l'héparine comme anticoagulant. Centrifugez les échantillons pendant 15 minutes à 2000-3000 t/mn à 2 - 8°C d'ici 30 minutes de collection.
L'urine se rassemblent par le tube stérile. Centrifugeuse à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. En rassemblant le fluide liquide et céphalo-rachidien pleuroperitoneal, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.
Le surnageant de culture cellulaire se rassemblent par les tubes stériles en examinant sécrétez les composants. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, employez PBS (pH 7.2-7.4) pour diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Endommagez les cellules pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugez à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Tissus de rinçage de tissu dans PBS (pH 7,4) pour enlever le sang excédentaire complètement et à peser avant homogénéisation. Hachez les tissus et homogénéisez-les dans PBS (pH7.4) avec un homogénisateur en verre sur la glace. Dégelez à 2-8°C ou gelez à la centrifugeuse de -20°C. à 2000-3000 t/mn pendant approximativement 20 minutes.
Préparation de réactif
Tous les réactifs devraient être apportés à la température ambiante avant emploi.
La norme reconstituent le 120μl de la norme (160ng/ml) avec 120μl de diluant standard pour produire d'une solution de l'action standard 80ng/ml. Permettez à la norme de se reposer pendant 15 minutes avec l'agitation douce avant de faire des dilutions. Préparez les points standard en double en diluant en série le 1:2 de la solution d'action standard (80ng/ml) avec le diluant standard pour produire les solutions 40ng/ml, 20ng/ml, 10ng/ml et 5ng/ml. Le diluant standard sert de norme zéro (0 ng/ml). Toute solution restante devrait être gelée à -20°C et être employée dans un délai d'un mois. La dilution des solutions étalons suggérées sont comme suit :
| 80ng/ml |
No.5 standard |
diluant original de la norme 120μl + de la norme 120μl |
| 40ng/ml |
No.4 standard |
120μl standard diluant de la norme No.5 + 120μl |
| 20ng/ml |
No.3 standard |
120μl standard diluant de la norme No.4 + 120μl |
| 10ng/ml |
No.2 standard |
120μl standard diluant de la norme No.3 + 120μl |
| 5ng/ml |
No.1 standard |
120μl standard diluant de la norme No.2 + 120μl |
| Concentration standard |
No.5 standard |
No.4 standard |
No.3 standard |
No.2 standard |
No.1 standard |
| 160ng/ml |
80ng/ml |
40ng/ml |
20ng/ml |
10ng/ml |
5ng/ml |
Tampon 20ml dilué de lavage du concentré 30x de tampon de lavage dans désionisé ou eau distillée pour rapporter 500 ml de tampon du lavage 1x. Si les cristaux ont formé dans le concentré, mélange doucement jusqu'à ce que les cristaux se soient complètement dissous.
Procédure d'analyse
1. Préparez tous les réactifs, solutions étalons et échantillons comme instruits. Apportez tous les réactifs à la température ambiante avant emploi. L'analyse est exécutée à la température ambiante.
2. Déterminez le nombre de bandes requises pour l'analyse. Insérez les bandes dans les cadres pour l'usage. Les bandes inutilisées devraient être stockées à 2-8°C.
3. Ajoutez la norme 50μl à la norme bien. Note : N'ajoutez pas l'anticorps à la norme bien parce que la solution étalon contient l'anticorps biotinylated.
4. Ajoutez l'échantillon 40μl aux puits témoin et puis ajoutez l'anti-OPN anticorps 10μl aux puits témoin, puis ajoutez le streptavidin-HRP 50μl aux puits témoin et aux puits standard (puits de contrôle non vide). Mélangez bien. Couvrez le plat de scelleur. Incubez 60 minutes à 37°C.
5. Enlevez le scelleur et lavez le plat 5 fois avec le tampon de lavage. Imbibez de les puits au moins le tampon de lavage de 0,35 ml pour 30 secondes à 1 minute pour chaque Washington. Pour le lavage automatisé, aspirez tous les puits et lavez 5 fois avec le tampon de lavage, remplissant au-dessus du niveau jaillit avec le tampon de lavage. Épongez le plat sur les serviettes de papier ou tout autre matériel absorbant.
6. Ajoutez la solution A du substrat 50μl à chacun puits et puis ajoutez la solution B du substrat 50μl à chacun bien. Incubez le plat couvert de nouveau scelleur pendant 10 minutes à 37°C dans l'obscurité.
7. Ajoutez 50μl arrêtent la solution à chacun bien, la couleur bleue changera en jaune immédiatement.
8. Déterminez la densité optique (valeur d'OD) de chacun puits immédiatement utilisant un ensemble de lecteur de microplate à 450 nanomètre à moins de 10 menuets après avoir ajouté la solution d'arrêt.
